1/2MS+0.5mol/L NAA
（1）配製ms大量元素母液 一般將大量元素分別配製成100倍的母液，使用時再分別稀釋100倍。 分別稱取 nh4no3 165g kh2po4 17g kno3 190g cacl2·2h2o 44g mgso4·7h2o 37g 各自配成1l的母液。倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 （2）配製ms微量元素母液 一般將微量元素配製成100倍母液。 依次稱取 ki 0.083g na2moo4·2h2o 0.025g h3bo3 0.62g cuso4·5h2o 0.0025g mnso4·h2o 1.69g cocl2·6h2o 0.0025g znso4·7h2o 0.86g 配成1l母液，倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 cuso4·5h2o和cocl2·6h2o 由於稱取量很小，如果天平精確度沒有達到萬分之一，可先配成調整液。 分別稱取 cuso4·5h2o 0.05g cocl2·6h2o 0.05g 各自配成100ml的調整液，然後取5ml就還有0.0025g的量。 （3）配製ms有機母液 一般配製成100倍ms有機母液。 依次稱取 肌醇 10g 鹽酸硫胺素（vb1） 0.01g 煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 鹽酸吡哆醇（vb6） 0.05g 配成1l母液，倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 （4）配製ms鐵鹽母液 一般配製成100倍ms鐵鹽母液。 依次稱取 edta二鈉 3.73g feso4·7h2o 2.78g 配成1l母液，倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 所以ms母液有5種大量元素母液，加上ms微量元素母液、ms有機母液和ms鐵鹽母液，共8種母液。 激素母液的配製 各種生長素和細胞分裂素要單獨配製，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的naoh溶解，細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解，然後再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。 2、配製培養基 以配置1l ms培養基為例，按順序進行如下操作： （1）先在燒杯中放入一些蒸餾水。 （2）分別取上面八種母液10ml倒入。 （3）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。 （4）加蒸餾水用量筒定溶至1l。 （5）按設計好的方案新增各種激素，由於激素的用量很小，而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取，減少誤差。 （6）用精密試紙或酸度計調整ph至5.7-5.8。（有條件的話使用酸度計，比較精確） 可配1當量的hcl和1當量的naoh用來調溶液ph值。 1當量hcl配製：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。 1當量naoh配製：稱取naoh 4g 配成100ml溶液。 （7）稱取5g左右瓊脂粉（質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。 （8）稍微冷卻後，分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子紮緊。 （9）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。 （10）滅菌後從滅菌鍋中取出培養基，平放在實驗臺上令其冷卻凝固。
二、滅菌
滅菌是組織培養重要的工作之一。初學者要清楚有菌和無菌的範疇。有菌的範疇是：凡是暴露在空氣中的物體，接觸自然水源的物體，至少它的表面都是有菌的。依此觀點，無菌室等未處理的地方、超淨臺的表面、簡單煮沸的培養基、我們使用的刀、剪在未處理之前、我們身體的整個外表及與外界相連的內表，如整個消化道、呼吸道，即我們撥出的氣體、培養容器無論洗得多幹淨等等都是有菌的。 這裡所指的菌，包括細菌、真菌、放線菌、藻類及其他微生物。菌的特點是：極小，肉眼看不見。無處不在，無時不有，無孔不入。在自然條件下忍耐力強，生活條件要求簡單，繁殖力極強，條件適宜時便可大量滋生。 無菌的範疇是：經高溫灼燒或一定時間蒸煮過後的物體，經其他物理或化學的滅菌方法處理後的物體（當然這些方法必須已經證明是有效的），高層大氣、岩石內部、健康的動、植物的不與外部接觸的組織內部，強酸強鹼，化學元素滅菌劑等表面和內部都是無菌的。從以上可以看出：在地球表面無菌世界要比有菌世界小的多。 滅菌是指用物理或化學的方法，殺死物體表面和孔隙內的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質全部殺死。與此相關的一個概念是消毒，它指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發生危害作用，顯然經過消毒，許多細菌芽孢、黴菌厚垣孢子等不會完全殺死，即由於在消毒後的環境裡和物品上還有活著的微生物，所以透過嚴格滅菌的操作空間（接種、超淨臺等）和使用的器皿，以及操作者的衣著和手都不帶任何活著的微生物。在這樣的條件下進行的操作，就叫做無菌操作。 植物組織培養對無菌條件的要求是非常嚴格的，甚至超過微生物的培養要求，這是因為培養基含有豐富的營養，稍不小心就引起雜菌汙染。要達到徹底滅菌的目的，必須根據不同的物件採取不同的切實有效的方法滅菌，才能保證培養時不受雜菌的影響，使試管苗能正常生長。 常用的滅菌方法可分為物理的和化學的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、溼熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學方法是使用昇汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學藥品處理。這些方法和藥劑要根據工作中的不同材料不同目的適當選用。 1、培養基用溼熱滅菌 培養基在製備後的24小時內完成滅菌工序。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內溫度也隨之增加。在0.1mpa的壓力下，鍋內溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。 注意完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排淨空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關閉放氣閥，通電後，待壓力上升到0.05mpa時，開啟放氣閥，放出空氣，待壓力錶指標歸零後，再關閉放氣閥。 關閥再通電後，壓力錶上升達到0.1mpa時，開始計時，維持壓力0.1-0.15mpa，20分鐘。 按容器大小不同，保壓時間有所不同，見表。該表所列數字是徹底滅菌很保險的數字，如果容器體積較大，但是放置的數量很少，也可以減少時間。
三、接種
接種時由於有一個敞口的過程，所以是極易引起汙染的時期，這一時期主要由空氣中的細菌和工作人員本身引起，接種室要嚴格進行空間消毒。接種室內保持定期用1%-3%的高錳酸鉀溶液對裝置、牆壁、地板等進行搽洗。除了使用前用紫外線和甲醛滅菌外，還可在使用期間用70%的酒精或3%的來蘇兒噴霧，使空氣中灰塵顆粒沉降下來。無菌操作可按以下步驟進行： （1）在接種4小時前用甲醛燻蒸接種室，並開啟其內紫外線燈進行殺菌； （2）在接種前20分鐘，開啟超淨工作臺的風機以及臺上的紫外線燈； （3）接種員先洗淨雙手，在緩衝間換好專用實驗服，並換穿拖鞋等； （4）上工作臺後，用酒精棉球搽拭雙手，特別是指甲處。然後搽拭工作臺面； （5）先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然後反覆過火尖端處，對培養皿要過火烤乾； （6）接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等； （7）接種完畢後要清理乾淨工作臺，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續接種，每5天要大強度滅菌一次。 接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官，經切割或剪裁成小段或小塊，放入培養基的過程。現將接種前後的程式連貫地介紹。 無菌接種步驟： （1）將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超淨臺上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最後瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。 （2）材料吸乾後，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對材料進行適當的切割。如葉片切成0.5cm平方的小塊；莖切成含有一個節的小段。微莖尖要剝成只含1-2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經常灼燒接種器械，防止交叉汙染。 （3）用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養基上。具體操作過程（以試管為例）是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口靠近酒精燈火焰，並將管口在火焰上方轉動，使管口裡外灼燒數秒鐘。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口裡面。然後用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內，輕輕插入培養基上。若是葉片直接附在培養基上，以放1-3塊為宜。至於材料放置方法除莖尖、莖段要正放（尖端向上）外，其他尚無統一要求。接種完後，將管口在火焰上再灼燒數秒種。並用棉塞，塞好後，包上包口紙，包口紙裡面也要過火。
四、培養
培養指把培養材料放在培養室（有光照、溫度條件、無菌）裡，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進一步分化成再生植株的過程。 1、培養方法 （1）固體培養法 即用瓊脂固化培養基來培養植物材料的方法。是現在最常用的方法。雖然該方法裝置簡單，易行，但養分分佈不均，生長速度不均衡，並常有褐化中毒現象發生。 （2）液體培養法 即用不加固化劑的液體培養基培養植物材料的方法。由於液體中氧氣含量較少，所以通常需要透過攪動或振動培養液的方法以確保氧氣的供給，採用往復式搖床或旋轉式搖床進行培養，其速度一般為50-100r/min，這種定期浸沒的方法，既能使培養基均一，又能保證氧氣的供給。
1/2MS+0.5mol/L NAA
（1）配製ms大量元素母液 一般將大量元素分別配製成100倍的母液，使用時再分別稀釋100倍。 分別稱取 nh4no3 165g kh2po4 17g kno3 190g cacl2·2h2o 44g mgso4·7h2o 37g 各自配成1l的母液。倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 （2）配製ms微量元素母液 一般將微量元素配製成100倍母液。 依次稱取 ki 0.083g na2moo4·2h2o 0.025g h3bo3 0.62g cuso4·5h2o 0.0025g mnso4·h2o 1.69g cocl2·6h2o 0.0025g znso4·7h2o 0.86g 配成1l母液，倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 cuso4·5h2o和cocl2·6h2o 由於稱取量很小，如果天平精確度沒有達到萬分之一，可先配成調整液。 分別稱取 cuso4·5h2o 0.05g cocl2·6h2o 0.05g 各自配成100ml的調整液，然後取5ml就還有0.0025g的量。 （3）配製ms有機母液 一般配製成100倍ms有機母液。 依次稱取 肌醇 10g 鹽酸硫胺素（vb1） 0.01g 煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g 鹽酸吡哆醇（vb6） 0.05g 配成1l母液，倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 （4）配製ms鐵鹽母液 一般配製成100倍ms鐵鹽母液。 依次稱取 edta二鈉 3.73g feso4·7h2o 2.78g 配成1l母液，倒入1l試劑瓶中，存放於冰箱中。 所以ms母液有5種大量元素母液，加上ms微量元素母液、ms有機母液和ms鐵鹽母液，共8種母液。 激素母液的配製 各種生長素和細胞分裂素要單獨配製，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的naoh溶解，細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解，然後再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。 2、配製培養基 以配置1l ms培養基為例，按順序進行如下操作： （1）先在燒杯中放入一些蒸餾水。 （2）分別取上面八種母液10ml倒入。 （3）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。 （4）加蒸餾水用量筒定溶至1l。 （5）按設計好的方案新增各種激素，由於激素的用量很小，而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取，減少誤差。 （6）用精密試紙或酸度計調整ph至5.7-5.8。（有條件的話使用酸度計，比較精確） 可配1當量的hcl和1當量的naoh用來調溶液ph值。 1當量hcl配製：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。 1當量naoh配製：稱取naoh 4g 配成100ml溶液。 （7）稱取5g左右瓊脂粉（質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。 （8）稍微冷卻後，分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子紮緊。 （9）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。 （10）滅菌後從滅菌鍋中取出培養基，平放在實驗臺上令其冷卻凝固。
二、滅菌
滅菌是組織培養重要的工作之一。初學者要清楚有菌和無菌的範疇。有菌的範疇是：凡是暴露在空氣中的物體，接觸自然水源的物體，至少它的表面都是有菌的。依此觀點，無菌室等未處理的地方、超淨臺的表面、簡單煮沸的培養基、我們使用的刀、剪在未處理之前、我們身體的整個外表及與外界相連的內表，如整個消化道、呼吸道，即我們撥出的氣體、培養容器無論洗得多幹淨等等都是有菌的。 這裡所指的菌，包括細菌、真菌、放線菌、藻類及其他微生物。菌的特點是：極小，肉眼看不見。無處不在，無時不有，無孔不入。在自然條件下忍耐力強，生活條件要求簡單，繁殖力極強，條件適宜時便可大量滋生。 無菌的範疇是：經高溫灼燒或一定時間蒸煮過後的物體，經其他物理或化學的滅菌方法處理後的物體（當然這些方法必須已經證明是有效的），高層大氣、岩石內部、健康的動、植物的不與外部接觸的組織內部，強酸強鹼，化學元素滅菌劑等表面和內部都是無菌的。從以上可以看出：在地球表面無菌世界要比有菌世界小的多。 滅菌是指用物理或化學的方法，殺死物體表面和孔隙內的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質全部殺死。與此相關的一個概念是消毒，它指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發生危害作用，顯然經過消毒，許多細菌芽孢、黴菌厚垣孢子等不會完全殺死，即由於在消毒後的環境裡和物品上還有活著的微生物，所以透過嚴格滅菌的操作空間（接種、超淨臺等）和使用的器皿，以及操作者的衣著和手都不帶任何活著的微生物。在這樣的條件下進行的操作，就叫做無菌操作。 植物組織培養對無菌條件的要求是非常嚴格的，甚至超過微生物的培養要求，這是因為培養基含有豐富的營養，稍不小心就引起雜菌汙染。要達到徹底滅菌的目的，必須根據不同的物件採取不同的切實有效的方法滅菌，才能保證培養時不受雜菌的影響，使試管苗能正常生長。 常用的滅菌方法可分為物理的和化學的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、溼熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學方法是使用昇汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學藥品處理。這些方法和藥劑要根據工作中的不同材料不同目的適當選用。 1、培養基用溼熱滅菌 培養基在製備後的24小時內完成滅菌工序。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內溫度也隨之增加。在0.1mpa的壓力下，鍋內溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。 注意完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排淨空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關閉放氣閥，通電後，待壓力上升到0.05mpa時，開啟放氣閥，放出空氣，待壓力錶指標歸零後，再關閉放氣閥。 關閥再通電後，壓力錶上升達到0.1mpa時，開始計時，維持壓力0.1-0.15mpa，20分鐘。 按容器大小不同，保壓時間有所不同，見表。該表所列數字是徹底滅菌很保險的數字，如果容器體積較大，但是放置的數量很少，也可以減少時間。
三、接種
接種時由於有一個敞口的過程，所以是極易引起汙染的時期，這一時期主要由空氣中的細菌和工作人員本身引起，接種室要嚴格進行空間消毒。接種室內保持定期用1%-3%的高錳酸鉀溶液對裝置、牆壁、地板等進行搽洗。除了使用前用紫外線和甲醛滅菌外，還可在使用期間用70%的酒精或3%的來蘇兒噴霧，使空氣中灰塵顆粒沉降下來。無菌操作可按以下步驟進行： （1）在接種4小時前用甲醛燻蒸接種室，並開啟其內紫外線燈進行殺菌； （2）在接種前20分鐘，開啟超淨工作臺的風機以及臺上的紫外線燈； （3）接種員先洗淨雙手，在緩衝間換好專用實驗服，並換穿拖鞋等； （4）上工作臺後，用酒精棉球搽拭雙手，特別是指甲處。然後搽拭工作臺面； （5）先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然後反覆過火尖端處，對培養皿要過火烤乾； （6）接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等； （7）接種完畢後要清理乾淨工作臺，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續接種，每5天要大強度滅菌一次。 接種是將已消毒好的根、莖、葉等離體器官，經切割或剪裁成小段或小塊，放入培養基的過程。現將接種前後的程式連貫地介紹。 無菌接種步驟： （1）將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超淨臺上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最後瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或濾紙上。 （2）材料吸乾後，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對材料進行適當的切割。如葉片切成0.5cm平方的小塊；莖切成含有一個節的小段。微莖尖要剝成只含1-2片幼葉的莖尖大小等。在接種過程中要經常灼燒接種器械，防止交叉汙染。 （3）用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養基上。具體操作過程（以試管為例）是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口靠近酒精燈火焰，並將管口在火焰上方轉動，使管口裡外灼燒數秒鐘。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口裡面。然後用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內，輕輕插入培養基上。若是葉片直接附在培養基上，以放1-3塊為宜。至於材料放置方法除莖尖、莖段要正放（尖端向上）外，其他尚無統一要求。接種完後，將管口在火焰上再灼燒數秒種。並用棉塞，塞好後，包上包口紙，包口紙裡面也要過火。
四、培養
培養指把培養材料放在培養室（有光照、溫度條件、無菌）裡，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織或進一步分化成再生植株的過程。 1、培養方法 （1）固體培養法 即用瓊脂固化培養基來培養植物材料的方法。是現在最常用的方法。雖然該方法裝置簡單，易行，但養分分佈不均，生長速度不均衡，並常有褐化中毒現象發生。 （2）液體培養法 即用不加固化劑的液體培養基培養植物材料的方法。由於液體中氧氣含量較少，所以通常需要透過攪動或振動培養液的方法以確保氧氣的供給，採用往復式搖床或旋轉式搖床進行培養，其速度一般為50-100r/min，這種定期浸沒的方法，既能使培養基均一，又能保證氧氣的供給。