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  • 1 # 風過無痕44841397

    標記基因是一種已知功能或已知序列的基因,能夠起著特異性標記的作用。在基因工程意義上來說,它是重組DNA載體的重要標記,通常用來檢驗轉化成功與否;在基因定位意義上來說,它是對目的基因進行標誌的工具,通常用來檢測目的基因在細胞中的定位。

    2,標記基因如何篩選?

    標記基因可以是特有的抗性基因,成功匯入並表達該標記基因的生物就具有相應的抗性,據此判斷基因表達載體是否成功匯入細胞內.此外,標記基因也可以是用放射性同位素標記的基因,透過檢測放射性來判斷基因表達載體是否成功匯入受體細胞.

    在基因表達載體中,由於構建載體的目的不同,需要的標記基因也不同。有的標記基因是質粒固有的,有的標記基因是另外加上的.一般情況下,質粒載體在基因組中有1~2個篩選標記,為寄主提供易於檢測的表型特徵.

    在高中生物選修3的教科書中,基因工程專題中常用的標記基因均為存在於質粒上的抗性基因,如抗四環素基因,將目的基因接到含該標記基因的質粒上,再將重組質粒匯入受體細胞。理論上,受體細胞(如大腸桿菌)就對四環素表現抗性,當人們用選擇培養基(比如含有四環素的培養基)來培養受體細胞時,能夠在培養基中存活下來的受體細胞就可以認為是成功地匯入了重組質粒,這樣,成功匯入重組質粒的細胞就被選擇出來。

    在此,需要注意的是,標記基因只是篩選成功匯入基因表達載體的受體細胞的一種工具,只是間接地證明包含目的基因的基因表達載體匯入成功,不能為目的基因是否成功融合到受體細胞提供直接證據。因此,在上述選擇性培養基中,能夠存活下來的細胞,只能證明細胞體記憶體在擁有標記基因的質粒,不能直接表明質粒上-定存在目的基因,即這種細胞不一定能表達出人們想要的細胞產物.接下來要進行目的基因的檢測與鑑定,對存活的受體細胞從分子水平到個體水平進行逐級檢測,從而得到目的基因成功匯入並表達的直接證據。

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