1. 充分脫蠟和水化。脫蠟可以先60度20 min，再用二甲苯兩次5~10 min；而水化用梯度乙醇從高濃度到低濃度浸洗，這些以便後面的結合反應充分、均勻。2. 把握好細胞通透的時間。一般根據切片的厚薄，選擇蛋白酶k的孵育時間，常用10~30 min，幾um切片用短時間；幾十um切片用長時間，透過摸索達到既不脫片，有能夠使後面的酶和抗體進入胞內。3. 適當延長TUNEL反應液的時間。一般是37度1h，你也可以根據你的凋亡損傷程度，選擇更長的時間，可長至2 h，但要結合你最終的背景著色。4. DAB顯色條件的選擇。一般DAB反應10分鐘左右，結合鏡下控制背景顏色，最長不超過30 min；我不喜歡用promega公司提供的DAB液（桃紅色），不利於辨認棕褐色。5.PBS的充分清洗。我個人認為，在TUNEL反應後和酶標反應後的清洗應十分嚴格，可增加次數達5次，因為這些清洗直接決定最後切片的非特異性著色。6. 此外，內源性POD的封閉也十分關鍵。對於肝臟、腎臟等血細胞含量多的組織，我的經驗是適當延長封閉時間和升高過氧化氫的濃度，可以達到很好的封閉效果，且不影響最終的特異性染色。 南昌中洪博元技術部
1. 充分脫蠟和水化。脫蠟可以先60度20 min，再用二甲苯兩次5~10 min；而水化用梯度乙醇從高濃度到低濃度浸洗，這些以便後面的結合反應充分、均勻。2. 把握好細胞通透的時間。一般根據切片的厚薄，選擇蛋白酶k的孵育時間，常用10~30 min，幾um切片用短時間；幾十um切片用長時間，透過摸索達到既不脫片，有能夠使後面的酶和抗體進入胞內。3. 適當延長TUNEL反應液的時間。一般是37度1h，你也可以根據你的凋亡損傷程度，選擇更長的時間，可長至2 h，但要結合你最終的背景著色。4. DAB顯色條件的選擇。一般DAB反應10分鐘左右，結合鏡下控制背景顏色，最長不超過30 min；我不喜歡用promega公司提供的DAB液（桃紅色），不利於辨認棕褐色。5.PBS的充分清洗。我個人認為，在TUNEL反應後和酶標反應後的清洗應十分嚴格，可增加次數達5次，因為這些清洗直接決定最後切片的非特異性著色。6. 此外，內源性POD的封閉也十分關鍵。對於肝臟、腎臟等血細胞含量多的組織，我的經驗是適當延長封閉時間和升高過氧化氫的濃度，可以達到很好的封閉效果，且不影響最終的特異性染色。 南昌中洪博元技術部