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  • 1 # 賴bao

    一、糖發酵管

    成分:

    牛肉膏 5g

    蛋白腖 10g

    氯化鈉 3g

    磷酸氫二鈉 2g

    0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL

    蒸餾水 1000mL

    PH 7.4

    製法

    1. 葡萄糖發酵管按上述成分配好後,按0.5%加入葡萄糖,分裝於有一個倒置小管的小試管內,121℃高壓滅菌15min。

    2. 其他各種糖發酵管可按上述成分配好後,分裝每瓶1000 mL,121℃高壓滅菌15min。另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5mL糖溶液加入於100 mL培養基內,以無菌操作分裝小試管。

    注:蔗糖不純,加熱後會自行水解者,應採用過濾法除菌。

    試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種,於36℃±1℃培養,一般觀察2~3d。遲緩反應需觀察14~30d。

    二、乳糖膽鹽發酵管

    成分:

    蛋白腖 20g

    豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g

    乳糖 10g

    0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL

    蒸餾水 1000mL

    製法:將蛋白腖,膽鹽及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10 mL,並放入一個小倒管,115℃高壓滅菌15min。

    注:雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。

    三、5%乳糖發酵管

    成分:

    蛋白腖 0.2g

    氯化鈉 0.5g

    乳糖 5g

    2%溴麝香草酚藍水溶液 1.2mL

    蒸餾水 100mL

    pH 7.4

    製法:除乳糖以外的各成分:溶解於50mL蒸餾水內,校正pH。將乳糖溶解於另外50mL蒸餾水內,分別滅菌121 ℃ 15min,將兩液混合,以無菌操作分裝於滅菌小試管內。

    注:在此培養基內,大部分乳糖遲緩發酵的細菌可於ld內發酵。

    四、緩衝葡萄糖蛋白腖水(MR和VP試驗用)

    成分:

    磷酸氫二鉀 5g

    多腖 7g

    葡萄糖 5g

    蒸餾水 1000mL

    製法:溶化後校正pH,分裝試管,每管1mL ,121℃高壓滅菌15min。

    甲基紅(MR)試驗:自瓊脂斜面挑取少量培養物接種本培養基中,於36±1℃培養2~5d,哈夫尼亞菌則應在22~25℃培養。滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結果。鮮紅色為陽性,黃色為陰性,甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶於30mL95%乙醇中,然後加入20 mL蒸餾水。

    V-P試驗:用瓊脂培養物接種本培養基中,於36±1℃培養2~4d。哈夫尼亞菌則應在22~25℃培養。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL充分振搖試管,觀察結果陽性反應立刻或於數分鐘內出現紅色,如為陰性,應放在36±1℃下培養4h再進行觀察。

    五、營養明膠

    成分:

    蛋白腖 5g

    牛肉膏 3g

    明膠 120g

    蒸餾水 1000mL

    pH 6.8~7.0

    製法:加熱溶解,校正至pH7.4~7.6,分裝小管,121℃高壓滅菌10min,取出後迅速冷卻,使其凝固,複查最終pH應為6.8~7.0。

    試驗方法:用瓊脂培養物穿刺接種,放在22~25℃培養,每天觀察結果,記錄液化時間。或放在36士1℃培養,每天取出,放冰箱內30min後再觀察結果。

    六、苯丙氨酸培養基

    成分:

    酵母浸膏 3g

    DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g

    磷酸氫二鈉 1g

    氯化鈉 5g

    瓊脂 12g

    蒸餾水 1000mL

    製法:加熱溶解後分裝試管,121℃高壓滅菌15min,使成斜面。

    試驗方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養物,移種於苯丙氨酸瓊脂,在36士1℃培養4h或18~24h,滴加10%三氯化鐵溶液2~3滴,自斜面培養物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。

    七、蛋白腖水(靛基質試驗用)

    成分:

    蛋白腖(或胰蛋白腖)20g

    氯化鈉 5g

    蒸餾水 1000mL

    pH7.4

    製法:按上述成分配製,分裝小試管,121℃高壓滅菌15min。

    靛基質試劑

    柯凡克試劑:將5g對二甲氨基苯甲醛溶解於75mL戊醇中,然後緩慢加入濃鹽酸25ml。

    歐-波試劑:將1g對二甲氨基苯甲醛溶解於95mL95%乙醇內,然後緩慢加入濃鹽酸20 ml。試驗方法:挑取小量培養物接種,在36士1℃培養1~2d,必要時可培養4~5d。加入柯凡克試劑約0.5mL,輕搖試管,陽性者於試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5 mL,沿管壁流下,覆蓋於培養液表面,陽性者於液麵接觸處呈玫瑰紅色。

    注:蛋白腖中應含有豐富的色氨酸。每批蛋白腖買來後,應先用已知菌種鑑定後方可使用。

    八、硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)

    成分:

    牛肉膏 3g

    酵母浸膏 3g

    蛋白腖 10g

    硫酸亞鐵 0.2g

    硫代硫酸鈉 0.3g

    氯化鈉 5g

    瓊脂 12g

    蒸餾水 1000 mL

    製法:加熱溶解,校正pH,分裝試管,115℃高壓滅菌15min,取出直立候其凝固。

    試驗方法:挑取瓊脂培養物,沿管壁穿刺,於36士1℃培養1~2d,觀察結果。產硫化氫者使培養基變為黑色。

    注:腸桿菌科細菌測定硫化氫的產生,應採用三糖鐵瓊脂或本培養基。

    九、尿素瓊脂

    成分:

    蛋白腖 1g

    氯化鈉5g葡萄糖1g

    磷酸二氫鉀 2g

    4%酚紅溶液 3 mL

    瓊脂 20g

    蒸餾水 1000 mL

    20%尿素溶液 100mL

    製法:將除尿素和瓊脂以外的成分配好,並校正pH,加入瓊脂,加熱溶化並分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min。冷至50~55℃,加入經除菌過濾的尿素溶液,尿素的最終濃度為2%,最終pH應為7.2±0.1.分裝於滅菌試管內,放成斜面備用。

    試驗方法:挑取瓊脂培養物接種,在36士1℃培養24h,觀察結果。尿素酶陽性者由於產鹼而使培養基變為紅色。

    十、氰化鉀(KCN)培養基

    成分:

    蛋白腖10g

    氯化鈉 5g

    磷酸二氫鉀 0.225g

    磷酸氫二鈉 5.64g

    蒸餾水 1000 mL

    0.5%氰化鉀溶液 20 mL

    pH 7.6

    製法:將除氰化鉀以外的成分配好後分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內使其充分冷卻。每100 mL培養基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最後濃度為1:10000),分裝於12mm*100mm滅菌試管,每管約4mL,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4℃冰箱內,至少可儲存兩個月。同時,將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基,分裝試管備用。

    十一、營養瓊脂

    成分:

    蛋白腖10g

    牛肉膏3g

    氯化鈉5g

    瓊脂15~20g

    蒸餾水1000mL

    製法:將除瓊脂以外的各成分溶解於蒸餾水內,加入15%氫氧化鈉溶液約2mL,校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化分裝燒瓶,121℃高壓滅菌15min。

    注:此培養基可供一般細菌培養之用,可傾注平板或製成斜面。如用於菌落計數,瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面,則應為2%。

    十二、營養肉湯

    成分:

    蛋白腖 10g

    牛肉膏 3g

    氯化鈉 5g

    蒸餾水 1000mL

    pH7.4

    製法:按上述成分混合,溶解後校正pH,分裝燒瓶,每瓶225 mL ,121℃高壓滅菌15min。

    十三、緩衝蛋白腖水(BP)

    成分:

    蛋白腖 10g

    氯化鈉 5g

    磷酸氫二鈉 9g

    磷酸二氫鉀 1.5g

    蒸餾水1000mL

    pH 7.2

    製法:按上述成分配好後以大燒瓶裝,121℃高壓滅菌15min。臨用時無菌分裝每瓶225mL。

    注:本培養基供沙門氏菌前增菌用。

    十四、EC肉湯

    成分:

    胰蛋白腖 20g

    3號膽鹽(或混合膽鹽)1.5g

    乳糖 5g

    磷酸氫二鉀 4g

    磷酸二氫鉀 1.5g

    氯化鈉 5g

    蒸餾水 1000mL

    製法:將上述成分混合,溶解後,分裝有發酵倒管的試管中,121℃高壓滅菌15min。最終pH為6.9±0.2。

    十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)

    基礎培養基

    多腖或眎腖 5g

    膽鹽 1g

    碳酸鈣 10g

    硫代硫酸鈉 3g

    蒸餾水 1000mL

    碘溶液

    碘 6g

    碘化鉀 5g

    蒸餾水 20 mL

    製法:將基礎培養基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL。分裝時應隨時振搖,使其中的碳酸鈣混勻,121℃高壓滅菌15min備用。臨用時每100mL基礎培養基中加入碘溶液2mL,,0.1%煌綠溶液1mL。

    十六、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)

    成分:

    蛋白腖 5g

    乳糖 4g

    亞硒酸氫鈉 4g

    磷酸氫二鈉 5.5g

    磷酸二氫鉀 4.5g

    L-胱氨酸 0.01g

    蒸餾水 1000mL

    1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1g或(DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成。

    製法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解於900mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解於100mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL。

    分裝於滅菌瓶中.每瓶100mL,pH應為7.0±0.1。

    十七、亞硫酸鉍瓊脂(BS)

    成分:

    蛋白腖 10g

    牛肉膏 5g

    葡萄糖 5g

    硫酸亞鐵 0.3g

    磷酸氫二鈉 4g

    煌綠 0.025g

    檸檬酸鉍銨 2g

    亞硫酸鈉 6g

    瓊脂 18~20g

    蒸餾水 1000mL

    pH 7.5

    製法:

    1.將前面5種成分溶解於300mL蒸餾水中。

    2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解。

    3將瓊脂於600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至80℃。

    4將以上三液合併,補充蒸餾水至1000mL,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5mL,搖勻,冷至50~55℃,傾注平皿。

    注:此培養基不需高壓滅菌。製備過程不宜過分加熱,以免降低其選擇性。應在臨用前一天製備,貯存於室溫暗處,超過48h不宜使用。

    十八、三糖鐵瓊脂(TSI)

    成分:

    蛋白腖 20g

    牛肉膏 5g

    乳糖 10g

    蔗糖 10g

    葡萄糖 1g

    氯化鈉 5g

    硫酸亞鐵銨 0.2g

    硫代硫酸鈉 0.2g

    瓊脂 12g

    酚紅 0.025g

    蒸餾水 1000 mL

    pH 7.4

    製法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解於蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝試管。裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面備用。

    十九、三糖鐵瓊脂換用方法

    成分:

    蛋白腖15g

    眎腖5g

    牛肉膏 3g

    酵母膏 3g

    乳糖 10g

    蔗糖 10g

    葡萄糖 1g

    氯化鈉 5g

    硫酸亞鐵 0.2g

    硫代硫酸鈉 0.3g

    瓊脂 12g

    酚紅 0.025g

    蒸餾水 1000 mL

    pH7.4

    製法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解於蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 mL,搖勻,分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層。121℃高壓滅菌15min,放置高層斜面備用。

    二十、嗜鹽性試驗培養基

    成分:

    蛋白腖2g

    氯化鈉 按不同量加

    蒸餾水100 mL

    pH7.7

    製法:配製2%蛋白腖水,校正pH,共配製5瓶,每瓶100mL。每瓶分別加入不同量的氯化鈉:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解後分裝試管,121℃高壓滅菌15min。

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