利用凍精冷配技術對肉牛應用人工授精已越來越廣泛，這對於肉牛品種的改良，以及提高肉牛的生產效率方面起到了關鍵的作用，是肉牛規模化生產必備的技術，而人工授精受胎率則反映了人工授精技術的高低。 檢查凍精的質量和正確的凍精解凍技術 凍精的質量是冷配成功與否的關鍵，凍精在生產、貯存以及運輸過程中都要保證凍精的質量，確保活力在0.3以上。工作人員在輸精前要做好精液的檢驗工作，取解凍好的精液在顯微鏡下觀察，每次觀察3~5個視野，當呈直線前進的精子數佔總數的30%，才可用於輸精，才能保證母牛正常受精，以提高受胎率，經檢驗不合格的凍精堅決不能使用。而輸精人員在輸精的過程中也要嚴格按照程式進行操作，以最大程度保證精子的活力不受外來或人為因素的影響。 凍精的正確解凍是保持精子活力的關鍵。在解凍前，先將裝有適量水的燒杯置於水溫在40℃的恆溫水浴箱內預熱，將裝有維生素B12解凍液的小試管放入燒杯中預熱一段時間後，用鑷子取出1粒凍精放入試管中，輕搖解凍，當融化2/3時，將試管取出，繼續搖動直到凍精完全融化。解凍過程要做好到快取、快投、快解、快用，最好在融化後的1~2h內進行輸精，以保證精子的活力在最佳的狀態。要注意，在整解凍的過程中要保持環境的衛生，防止精液受到汙染，鑷子要在液氮中進行預冷後再使用。 掌握母牛發情規律和適宜的輸精時間 掌握母牛的發情規律，做好發情鑑定，以確定最佳的輸精時間，可以有效提高凍精冷配的受胎率，母牛的發情週期為18~24d，發情的時間可持續1~3d，一般母牛在發情時表現為興奮不安、不斷的哞叫，排尿的次數增多，陰門腫脹並且有黏液流出，爬跨其他母牛或接受其他牛的爬跨。在母牛外在表現出發情時，可以進一步的透過陰道檢查法和直腸檢查法來鑑定母牛的發情狀況。透過直腸檢查發情母牛的子宮和卵巢上卵泡的變化可以做出準確的判斷，並由此來推算母牛發情排卵的時間來確定最佳的輸精時間來提高配種受胎率。一般發情旺期到來時，發情母牛卵巢上的卵泡的體積停止增長，由硬變軟，卵泡壁變薄，在發情後期有一碰即破的感覺，波動明顯，彈性減弱。卵泡與卵巢有明顯的分界，在4~8h破裂排出卵子，並在排卵處在10h後形成黃體。並且發情母牛的子宮內膜會增生充血，多數母牛在發情旺盛期，子宮被觸控時可以感覺到子宮的質地變硬，捲曲收縮，體積增大，並呈現勃起狀，這些變化都是母牛發情最可靠的特徵。 對發情母牛進行輸精的時間不當，或者沒有及時準確的進行配種，都會導致受胎率下降，因此，要掌握適宜的輸精時間。一般青母牛的發情可持續1d，老年母牛為2~3d，在利用凍精冷配時，為了提高受精效果，提高受胎率，最佳的輸精時間選擇在母牛接受爬跨，站立不動，外陰腫脹，子宮頸開口較大，併發紅有黏液流出，經直腸檢查時，發現子宮體粗而軟，子宮角有彈性，卵泡發育成熟，接近排卵時進行輸精。如果6~13h後，卵泡還未破裂，可進行第二次輸精，可以使受胎率得到很大的提高。 選擇恰當的輸精部位和掌握熟練的輸精方法 經多次的生產實踐表明，最佳的輸精部位是子宮體基部，在子宮角的分叉處。精液在此處會流向兩子宮角，從而保證了正常的受精，如果能夠準確觸控卵泡發育的一側，精液最好輸到有卵泡發育的一側子宮角基部，這樣可以很好的提高受胎率，還可以減少子宮膜受到損傷，防止母牛發生生殖道感染。 輸精位置的確定可以提高母牛的受胎率，而熟練的輸精方法也是提高受胎率的關鍵。採用直腸把握子宮頸深部輸精法，此法可以獲得較高的受胎率。在操作時左手伸入直腸，清除宿糞，肘部壓開陰裂，右手持輸精槍插入陰道，與直腸內左手配合將輸精槍匯入子宮頸口內，經2~3道皺褶到達子宮頸深部或子宮體向後拉一下，再徐徐推注精液；當準確判斷排卵側卵巢時，向排卵側子宮角輸精，但不插入過深；之後緩慢退出輸精槍，向上輕提一下子宮頸，以促使子宮頸口關閉，防止精液倒流，輸精完成。整個輸精過程要認真做到慢插、適深、輕注、緩抽，防止精液逆流。在輸精的過程中要做好輸精器具以及母牛外陰部的消毒工作，這樣可以減少由於消毒不徹底而引起的子宮疾病，而影響了精子的活力，從而降低了受胎率。 做好母牛的妊娠診斷並做好保胎工作 檢查時主要根據子宮的位置，檢查一側子宮角是否粗大，位置有無變化，卵巢上有沒有妊娠黃體。母牛在妊娠40d時，子宮角略增大、變粗，在妊娠60d時，子宮角以及卵巢垂入腹腔，孕角對未孕角大1倍，觸控時鬆軟有液體，並有較為明顯的波動，角間溝逐漸變平，子宮頸降到骨盆的入口處。 母牛在輸精配種後，對母牛進行妊娠診斷，確定人工授精成功後，要加強對母牛的飼養管理工作，提高母牛的營養水平，要求在滿足正常生理需求的基礎上，每天可補飼優質青草和適當的補喂精料，以保證營養供給充足，使胚胎健康生長。在平日的管理中要注意保胎，特別是在懷孕70d以內，要加強管理，防止流產，運動要適當，在懷孕後期，要防止早產的發生。

人工冷配技術

　　1、器械準備

　　細管輸精槍、溫度計各1支，鑷子、細管專用剪各1把，指甲剪1把，恆溫水浴鍋1臺。

　　2、細管凍精解凍

　　將恆溫水浴鍋調至溫度40℃-42℃，用鑷子從液氮罐取出細管凍精時，不能把細管袋拉出液氮罐口，把細管放入水浴鍋裡搖動10-15秒，使之升溫均勻。用吸水性好的紙巾擦乾細管，檢查所取精液的品種及型號，以細管棉塞端為底部，用手舉高與眼齊平，剪去0.5釐米左右封閉端，剪口要正，斷面要齊，剪完整圓切口，然後裝入輸精槍備用。

　　3、輸精方法

　　採用直腸把握輸精法。輸精前應先將待配母牛保定於配種架中，用溫肥皂水將陰門附近的糞便、汙物沖洗乾淨，然後用溫水沖洗。輸精員將手指甲剪短磨光，手臂套上乳膠手套，塗上一層潤滑劑，五指併攏成錐形，插入直腸，排出糞便。隔著直腸壁握住子宮頸管。左手臂稍微下壓，使陰門開張。右手持輸精管（槍），由陰門緩緩插入，開始先稍向上斜插，避開尿道口，然後再向下平插至子宮頸口，將輸精管前端深入子宮頸口內3㎝-4㎝（約2-3 個皺壁），將輸精管（槍）稍微後拉即可輸精，輸精後緩慢拔出輸精管（槍）。

　　4、注意事項

　　4.1 凍精在38℃-40℃溫度下進行鏡檢，鏡檢活力0.3以下者不予輸精。

　　4.2 直腸檢查或輸精，母牛努責、腸道形成空洞時，不要硬性抓捏。

　　4.3 冬季輸精要防止低溫對解凍後精液的冷打擊。

　　4.4 解凍後要立即輸精，精液存放不應超過1h。

1 規範牛改點，建立示範範點

1.1 各牛改點建設在母牛較為集中的村組，縣局和鄉鎮政府盡力為牛改點創造良好的工作環境條件，各牛改點存欄母牛達200頭以上，年改良數超過100頭;各點相應設立解凍室和操作室，洗滌消毒室等;雖然一些點受多種因素影響而不能規範分室建設，但冷配器械裝置較為齊全，正在逐步按規範化改進，為今後的開展打好基礎。

1.2 在兔場、基長兩鎮建立示範點各一個，進行規範化管理和操作。以示範點的經驗向全縣推廣和交流，帶動全縣凍配工作。2003年，兔場、基長兩示範點分別輸配母牛458頭和303頭，受胎率分別達到58.1%和61.3%，起到良好的示範作用。

1.3 嚴格技術操作規程，加強技術指導。縣品改站統一製作貴州省地方標準《牛冷凍精液人工授精技術操作規程》制度牌，頒發20個點和13個“三統兩分”場，並嚴格執行。縣站技術人員不定期巡迴各點，檢查、指導、督促執行技術操作規程，指導技術操作，及時解決各點遇到的技術難題。

2 開展技術培訓與宣傳諮詢

2.1 縣局舉辦了兩期畜牧技術培訓班，培訓期3個月，其中實際操作1個月。安排20名技術員參加技術強化訓練，提高了技術員理論和實際操作能力。另派3名技術幹部參加了省站舉辦的兩期牛羊繁殖技術培訓班，派出8名技術人員參加州畜牧發展中心舉辦的，由省站老師授課的牛改技術培訓班。由縣站牽頭，組織全縣牛改點技術員每月進行為期一天的技術交流，針對我縣牛改工作的各項實際情況交流總結，不斷提高。

2.2 舉辦鄉鎮農民技術培訓班。先後在兔場、城關、基長等10個鄉鎮開展牛改技術培訓班16期1137人，發放《母牛繁殖與肉牛飼養技術》資料1200餘份，增加了群眾對牛改工作的認識。

2.3 在兔場等8箇中心鄉鎮，利用趕場天鄉村群眾趕集開展技術諮詢16場次，諮詢1856人，發放技術資料2500多份;在6箇中心鄉鎮將當地所有的雜交牛集中起來供趕集的群眾參觀，啟發群眾。同時以牛改受益戶的事例向群眾宣傳，得到群眾的積極響應和支援。

1、嚴格凍精和解凍 凍精的正確解凍是精子保持活力的關鍵，解凍前，先取1個小燒杯，加入適量水，並使其懸浮於恆溫水箱中，水溫控制在39～40℃。然後取1支潔淨的小試管，加入1支維生素B12解凍液，並將該試管放於小燒杯中進行預熱一段時間。之後用鑷子從凍精管中取出1粒凍精，並迅速投放於試管中，並不停地輕輕搖動，當凍精有2/3～3/4融化時，則使其脫離水面，繼續搖動試管直到凍精顆粒完全融化。解凍過程要做到快取、快投、快解、快用，溶化後最好在1～2h內用於輸精。解凍過程中，凍精離開液氮表面和放入解凍液中一定要迅速，儘量縮短其在空間中停留時間。取出的顆粒凍精上不能附著凍霜，如果有則要稍加振動，使其脫落後再進行解凍。整個解凍過程中，必須保持環境衛生，防止發生汙染。夾取凍精前，所用的金屬鑷子必須在液氮中進行預冷，避免顆粒凍精黏附於鑷子上不易脫落。每支解凍液只能用於解凍l粒凍精，如多於1粒時，則要分別進行解凍，禁止將2粒凍精同時放入1支解凍液中。解凍後要鏡檢精子質量，塗於玻片上的精液薄厚要均勻。由於精子復甦需要一段時間，因此觀察精子活力時不能以剛開始觀察到的精子的運動情況來判定精子活力的等級。鏡檢時，一定要多觀察幾個視野，並適當調節上下焦距。因為載玻片與蓋玻片之間有一定的厚度，而死精子常常漂浮於上層，所以如若僅觀察上層精液，死精子數過多，則判定的活力等級容易偏低；如果進觀察中層精液，判定的活力等級就容易偏高。因此，要綜合觀察多個視野，防止做出誤判，以確定較為準確的活力等級。 2、做好發情鑑定 母牛發情時，外觀特徵表現為興奮不安、不斷哞叫，排尿次數增多，陰門腫脹，內壁潮紅，並有黏液流出，相互之間嗅聞、舔舐，接受其他牛爬跨和爬跨其他母牛。進入發情旺期後，有閹牛、公牛或其他母牛尾隨其後，開始拒絕爬跨，被爬跨時則站立不動，且回頭探望。母牛發情的實質是卵巢上的卵泡發育，並且排出成熟的卵子，因此透過直腸檢查發情母牛的子宮和卵巢上卵泡變化作出準確判別。發情旺期到來時，發情母牛卵巢上的卵泡體積會停止增大，由硬變軟，卵泡壁由厚變薄，波動明顯，彈性減弱。卵泡和卵巢有明顯分界，最後破裂釋放出卵子，並於排卵處形成一凹陷，形成黃體。發情母牛的子宮內膜增生充血，多數母牛在旺盛期被觸控時，子宮質地變硬，捲曲收縮，體積大於正常，呈勃起狀，該變化是判定母牛發情最可靠的特徵。 3、適時配種 授精技術不正確，容易導致精子活力降低，或者使精液根本沒有被送到子宮深部，是造成受胎率降低非常重要的因素之一。發情母牛進行授精的時間不當，或者沒有及時和準確進行早期妊娠診斷，導致誤配的發生或失去復配機會，進而造成流產等，都會降低母牛受胎率。因此，為提高母牛受胎率，必須掌握適宜的授精時機。為使母牛受胎率提高，還可實行二次輸精。在實際生產中，一般上午發情的母牛在當天晚上進行第一次輸精，第二天早晨進行第二次輸精；下午發情時，第二天早晨進行第一次輸精，到晚上進行第二次輸精。總之，實踐中必須掌握在母牛拒絕他牛爬跨後的6～8h，即排卵前的6h左右進行輸精適宜。 4、加強飼養管理 當母牛飼餵的飼料營養成分不足，如缺乏能量、蛋白質、維生素、礦物質等時，會直接對其生殖機能產生影響。因此，應選擇飼餵科學的配合飼料，滿足肉牛對各種營養物質的需要，以確保肉牛正常發情和妊娠，提高受胎率。目前，肉牛飼養大部分是採取粗放管理，主要進行放牧，即使補飼一些精料，也比較單一。因此，必須改變常規、傳統的飼養管理方式，加強飼養管理，並飼餵全價飼料。在適齡母牛配種期到來前，應使其達到中等膘情。 中國多數地區冬季寒冷，夏季又比較炎熱，造成母牛的繁殖率降低，這是由於適宜溫度和充足日照是提高母牛受胎率的自然條件。冬季的日照時間短，飼料中維生素含量過低，會導致母牛受胎率下降；夏季高溫時間長，會使母牛發情持續期縮短，導致遲配或漏配的發生增多。因此，保持氣候涼爽，日照時間足夠長和豐富的營養是提高母牛受胎率的環境條件。飼養管理工作主要包括調整牛群結構，合理規劃牛群配種、生產時間，認真做好各項記錄。

利用凍精冷配技術對肉牛應用人工授精已越來越廣泛，這對於肉牛品種的改良，以及提高肉牛的生產效率方面起到了關鍵的作用，是肉牛規模化生產必備的技術，而人工授精受胎率則反映了人工授精技術的高低。

檢查凍精的質量和正確的凍精解凍技術

凍精的質量是冷配成功與否的關鍵，凍精在生產、貯存以及運輸過程中都要保證凍精的質量，確保活力在0.3以上。工作人員在輸精前要做好精液的檢驗工作，取解凍好的精液在顯微鏡下觀察，每次觀察3~5個視野，當呈直線前進的精子數佔總數的30%，才可用於輸精，才能保證母牛正常受精，以提高受胎率，經檢驗不合格的凍精堅決不能使用。而輸精人員在輸精的過程中也要嚴格按照程式進行操作，以最大程度保證精子的活力不受外來或人為因素的影響。

凍精的正確解凍是保持精子活力的關鍵。在解凍前，先將裝有適量水的燒杯置於水溫在40℃的恆溫水浴箱內預熱，將裝有維生素B12解凍液的小試管放入燒杯中預熱一段時間後，用鑷子取出1粒凍精放入試管中，輕搖解凍，當融化2/3時，將試管取出，繼續搖動直到凍精完全融化。解凍過程要做好到快取、快投、快解、快用，最好在融化後的1~2h內進行輸精，以保證精子的活力在最佳的狀態。要注意，在整解凍的過程中要保持環境的衛生，防止精液受到汙染，鑷子要在液氮中進行預冷後再使用。

掌握母牛發情規律和適宜的輸精時間

掌握母牛的發情規律，做好發情鑑定，以確定最佳的輸精時間，可以有效提高凍精冷配的受胎率，母牛的發情週期為18~24d，發情的時間可持續1~3d，一般母牛在發情時表現為興奮不安、不斷的哞叫，排尿的次數增多，陰門腫脹並且有黏液流出，爬跨其他母牛或接受其他牛的爬跨。在母牛外在表現出發情時，可以進一步的透過陰道檢查法和直腸檢查法來鑑定母牛的發情狀況。透過直腸檢查發情母牛的子宮和卵巢上卵泡的變化可以做出準確的判斷，並由此來推算母牛發情排卵的時間來確定最佳的輸精時間來提高配種受胎率。一般發情旺期到來時，發情母牛卵巢上的卵泡的體積停止增長，由硬變軟，卵泡壁變薄，在發情後期有一碰即破的感覺，波動明顯，彈性減弱。卵泡與卵巢有明顯的分界，在4~8h破裂排出卵子，並在排卵處在10h後形成黃體。並且發情母牛的子宮內膜會增生充血，多數母牛在發情旺盛期，子宮被觸控時可以感覺到子宮的質地變硬，捲曲收縮，體積增大，並呈現勃起狀，這些變化都是母牛發情最可靠的特徵。

提高冷配受孕率，首先要掌握好發情期

　　一、母牛的發情表現

　　1、 發情初期：母牛鳴叫不安，食慾開始減退，想爬跨它牛，但拒絕公牛爬跨，外陰輕微紅腫，陰道粘膜充血，流出稀薄透明液體。直腸檢查子宮變軟，卵巢有一側增大，在卵巢上有卵泡，無彈性。此期維持10 h左右，不能輸精。

　　2、 發情中期：母牛極度不安，食慾停止，性慾旺盛，求配心切，爬跨它牛，外陰部明顯腫脹，流出粘液增多。直腸檢查子宮鬆軟，卵泡體積增大，直徑1.0㎝-1.5㎝，突出於卵巢表面，彈性強，有波動感。此期約維持8h-12h，輸精偏早。

　　3、 發情末期：母牛性慾減退，不再爬跨它牛，由不安轉為安靜，外陰部腫脹減退，粘液變稠，呈黃白色。直腸檢查子宮頸變鬆軟，卵泡壁變薄，波動很明顯，呈熟葡萄狀，有一觸即破感覺。此期約維持8h-10h，為最佳輸精時期。

　　二、發情鑑定

　　發情鑑定採用外部觀察和直腸觸控卵泡相結合，以直腸檢查卵泡發良程度為主要依據。

　　1、外部表現：發情母牛轉入發情後期，母牛表現安靜、食慾逐漸恢復正常、其他牛爬跨時，臀部躲避，陰門腫脹漸退，有皺紋。

　　2、黏液：陰道黏膜呈暗紅色、黏液量小、黏液顏色渾濁或灰白色。

　　3、直腸檢查：直腸觸控子宮、卵巢，判斷其長短、粗細、質地。順序是：手戴乳膠手套，塗以滑潤劑，五指併攏伸入肛門，清除宿糞後，手掌伸平，掌心向下，在骨盆底的正中有一長而稍扁的棒狀物為子宮頸。順著子宮頸向前伸進，可摸到子宮角間溝，溝的兩旁各有一條向前彎曲的圓筒狀物，是左右子宮角，沿著子宮角大彎向下側面摸，可摸到扁圓、柔軟而有彈性的卵巢。用手指觸控卵巢表面的卵泡發育程度，以確定是否輸精。

　　三、最佳輸精時期

　　母牛發情後什麼時間輸精最合適，這是提高母畜受胎率的關鍵。一般母牛排卵時間是在牛發情結束後的12-15小時，排出的卵子約需6-12小時到達受精部位，維持受精能力的時間一般不超過20小時。輸精後，精子大多數需2-3小時到達受精部位，在母牛生殖道內獲能需5-6小時，保持受精能力的時間約為30小時。因此，精子應先於卵子到達受精部位，才能獲得最佳受胎率。一般認為，輸精時間安排在排卵前6-18小時，受胎率高。但母牛排卵時間不容易掌握，在生產實踐中，可進行綜合分析判定。

　　1、計劃輸精兩次，可在母牛拒爬後進行第一次，間隔8-12小時進行第二次。也可採用早上爬跨，下午輸精，第二天上午視情況再復配一次；下午爬跨，次日早晨輸精，下午視情況再復配一次。若只進行一次輸精，可在拒爬後8-12小時進行。

　　2、由陰道流出的粘液粘稠、黃色、塊狀、子宮頸外口稍緊而硬，內口鬆軟輸精器容易插入時開始輸精，間隔8-12小時第二次輸精。

　　3、直腸觸控卵巢時，卵巢壁變薄，卵泡液波動明顯，有一觸即破之感，即可輸精，隔8-12小時再次輸精。

　　四、人工冷配技術

　　1、器械準備

　　細管輸精槍、溫度計各1支，鑷子、細管專用剪各1把，指甲剪1把，恆溫水浴鍋1臺。

　　2、細管凍精解凍

　　將恆溫水浴鍋調至溫度40℃-42℃，用鑷子從液氮罐取出細管凍精時，不能把細管袋拉出液氮罐口，把細管放入水浴鍋裡搖動10-15秒，使之升溫均勻。用吸水性好的紙巾擦乾細管，檢查所取精液的品種及型號，以細管棉塞端為底部，用手舉高與眼齊平，剪去0.5釐米左右封閉端，剪口要正，斷面要齊，剪完整圓切口，然後裝入輸精槍備用。

　　3、輸精方法

　　採用直腸把握輸精法。輸精前應先將待配母牛保定於配種架中，用溫肥皂水將陰門附近的糞便、汙物沖洗乾淨，然後用溫水沖洗。輸精員將手指甲剪短磨光，手臂套上乳膠手套，塗上一層潤滑劑，五指併攏成錐形，插入直腸，排出糞便。隔著直腸壁握住子宮頸管。左手臂稍微下壓，使陰門開張。右手持輸精管（槍），由陰門緩緩插入，開始先稍向上斜插，避開尿道口，然後再向下平插至子宮頸口，將輸精管前端深入子宮頸口內3㎝-4㎝（約2-3 個皺壁），將輸精管（槍）稍微後拉即可輸精，輸精後緩慢拔出輸精管（槍）。

　　4、注意事項

　　4.1 凍精在38℃-40℃溫度下進行鏡檢，鏡檢活力0.3以下者不予輸精。

　　4.2 直腸檢查或輸精，母牛努責、腸道形成空洞時，不要硬性抓捏。

　　4.3 冬季輸精要防止低溫對解凍後精液的冷打擊。

　　4.4 解凍後要立即輸精，精液存放不應超過1h

掌握好發情期，做到實時輸精。

在日常的飼養過程中，技術人員和飼養員要互相配合，時刻注意觀察，必須要及時發現母牛發情。由於母牛發情的持續期短，要注意對發情母牛及結束髮情母牛的觀察，防止漏情、漏配，做好輸精準備或及時補配。

掌握授精技術，做到母牛準確授精。

直腸把握子宮頸輸精法人工授精的一種方法、受胎率高，但要求輸精人員必須細心、認真，嚴防損傷母牛的生殖道，輸入的精液必須達到所要求的部位，防止精液外流。

輸精操作過程要嚴格消毒，謹慎操作，以防生殖道感染與損傷。精液的取用要合乎規範，以保證精子不被傷害。

及時治療生殖系統和全身性疾病，

肉牛全身和生殖器官疾病均可引起母牛不妊娠。為了採取合理的治療方案，臨床上應對病牛仔細檢查，確定病情，找出原因，並採取相應治療措施。引起母牛不妊娠的臨床表現有發情延遲、發行期縮短、持久發情、長期不發情和屢配不孕等，當牛群中大批母牛不妊娠時，要對飼養管理、健康狀況、繁殖管理技術等進行全面調查和綜合分析。

利用凍精冷配技術對肉牛應用人工授精已越來越廣泛，這對於肉牛品種的改良，以及提高肉牛的生產效率方面起到了關鍵的作用，是肉牛規模化生產必備的技術，而人工授精受胎率則反映了人工授精技術的高低。

牛人工輸精技術已經廣泛應用於畜牧業生產中,為提高受胎率,要抓好母牛的飼養管理,準確鑑定牛隻發情,把握最佳輸精時機,採用正確的輸精方法,做好配種後期的管理。