革蘭染色法
【步驟】:製片、染色、鏡檢
1、製片
塗片 :取潔淨載玻片一張,用接種環取生理鹽水2環,置於玻片上,接種環滅菌後,取細菌培養物少許與鹽水混勻,並塗成均勻薄膜塗片。如用液體材料,如痰、尿液、膿汁等可直接塗片,不必加生理鹽水。
乾燥 :塗片最好在室溫下自然乾燥,必要時可將標本面向上,小心間斷地在弱火高處烘乾,但切勿緊靠火焰將塗膜烤枯。
固定:塗片乾燥後,將標本片在酒精燈上快速的來回透過三次,共約2s~3s,注意溫度不可太高,以塗片塗膜的反面觸及面板覺輕微燙覺即可。
2、染色
結晶紫初染 1 min → 盧戈氏碘液媒染 1 min → 95%酒精脫色 30sec~1 min → 稀釋石炭酸復紅復染 1 min,油鏡觀察
【原理】:
①革蘭陽性細菌細胞壁結構較緻密,肽聚糖層厚,脂質含量少,乙醇不易滲入;革蘭陰性菌細胞壁結構較疏鬆,肽聚糖層少,脂質含量多,乙醇易滲入。
②革蘭陽性菌的等電點低,革蘭陰性菌的等電點較高,在相同pH條件下,革蘭陽性菌所帶負電荷比革蘭陰性菌多,與帶正電荷的結晶紫染料結合較牢固不易脫色。
【結果觀察】:紫色為陽性,紅色為陰性
【影響因素】
①操作因素:塗片太薄或太厚,固定時菌體過分受熱,以及脫色時間長短,都會影響染色結果
②染液因素:所有染液應防止染液蒸發而改變濃度,特別是盧戈碘液久存或受光作用後易失去媒染作用;塗片積水過多會改變染液濃度,影響染色效果
【意義】:
①鑑定細菌:可將細菌分為革蘭陽性菌(紫色)和革蘭陰性菌(紅色),
②觀察致病性:大多數G+菌以外毒素為主要致病物質,而G- 菌以內毒素為主要致病物質。兩者的致病機制和臨床表現各不相同,
【用途】:一般細菌學檢查或鑑定
我這個比較簡單概括,你最好詳細化,比如染色步驟
革蘭染色法
【步驟】:製片、染色、鏡檢
1、製片
塗片 :取潔淨載玻片一張,用接種環取生理鹽水2環,置於玻片上,接種環滅菌後,取細菌培養物少許與鹽水混勻,並塗成均勻薄膜塗片。如用液體材料,如痰、尿液、膿汁等可直接塗片,不必加生理鹽水。
乾燥 :塗片最好在室溫下自然乾燥,必要時可將標本面向上,小心間斷地在弱火高處烘乾,但切勿緊靠火焰將塗膜烤枯。
固定:塗片乾燥後,將標本片在酒精燈上快速的來回透過三次,共約2s~3s,注意溫度不可太高,以塗片塗膜的反面觸及面板覺輕微燙覺即可。
2、染色
結晶紫初染 1 min → 盧戈氏碘液媒染 1 min → 95%酒精脫色 30sec~1 min → 稀釋石炭酸復紅復染 1 min,油鏡觀察
【原理】:
①革蘭陽性細菌細胞壁結構較緻密,肽聚糖層厚,脂質含量少,乙醇不易滲入;革蘭陰性菌細胞壁結構較疏鬆,肽聚糖層少,脂質含量多,乙醇易滲入。
②革蘭陽性菌的等電點低,革蘭陰性菌的等電點較高,在相同pH條件下,革蘭陽性菌所帶負電荷比革蘭陰性菌多,與帶正電荷的結晶紫染料結合較牢固不易脫色。
【結果觀察】:紫色為陽性,紅色為陰性
【影響因素】
①操作因素:塗片太薄或太厚,固定時菌體過分受熱,以及脫色時間長短,都會影響染色結果
②染液因素:所有染液應防止染液蒸發而改變濃度,特別是盧戈碘液久存或受光作用後易失去媒染作用;塗片積水過多會改變染液濃度,影響染色效果
【意義】:
①鑑定細菌:可將細菌分為革蘭陽性菌(紫色)和革蘭陰性菌(紅色),
②觀察致病性:大多數G+菌以外毒素為主要致病物質,而G- 菌以內毒素為主要致病物質。兩者的致病機制和臨床表現各不相同,
【用途】:一般細菌學檢查或鑑定
我這個比較簡單概括,你最好詳細化,比如染色步驟