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  • 1 # 應憑志勇

    三個條件分別是:不需要誘導、高效表達和無致病性微生物。

    這個問題其實在我們的研究其實已經有所應用,下面以我自身的研究方向解釋一下具體應用和具體試驗技術。我是從事流感病毒研究,這一方面的研究主要包括對病毒生物學特性的研究,病毒的流行病學調查、疫苗的研發和抗病毒藥物的研發,而在抗病毒藥物研發方面,首先就要弄明白病毒入侵宿主細胞的機制和宿主因子影響病毒入侵宿主細胞的機制。假設我們篩選得到一個宿主因子a,能夠非常顯著的影響病毒入侵宿主細胞的過程,為了研究這個宿主因子的功能,我們就需要將這個基因高效穩定的在細胞中表達來研究其對病毒複製和入侵宿主細胞的影響,這個技術成為過表達細胞系,就是利用可以逆轉錄出慢病毒的並且含有基因a的質粒在修飾過的細胞系中逆轉錄出慢病毒,將該慢病毒純化濃縮以後侵染細胞,可以將該基因插入到宿主細胞的基因組中穩定表達,從而得到穩定表達基因a的過表達細胞系。具體過程如下:

    1、將基因a片段插入到pqcxin載體中。

    2、用構建的質粒轉染ap293細胞,幾天內取上清,即為表達a基因慢病毒。

    3、濃縮病毒侵染a549細胞,藥物篩選陽性細胞。

    4、鑑定陽性細胞分選克隆,並擴大培養,鑑定過表達陽性克隆。

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