rna聚合酶是以一條DNA鏈或RNA為模板，三磷酸核糖核苷為底物、透過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶，因為在細胞內與基因DNA的遺傳資訊轉錄為RNA有關，所以也稱轉錄酶。rna聚合酶作用於磷酸二酯鍵。

rna聚合酶需要四種核糖核苷酸三磷酸(NTP：ATP、GTP、CTP、UTP)作為RNA聚合酶的底物，DNA為模板，二價金屬離子Mg2+、Mn2+是該酶的必需輔因子。其催化的反應表示為：(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPi。RNA鏈的合成方向也是5’→3"，第一個核苷酸帶有3個磷酸基。其後每加入一個核苷酸脫去一個焦磷酸，形成磷酸二酯鍵，焦磷酸迅速水解的能量驅動聚合反應。與DNA聚合酶不同，RNA聚合酶無須引物，它能直接在模板上合成RNA鏈;RNA聚合酶能夠區域性解開DNA的兩條鏈，所以轉錄時無須將DNA雙鏈完全解開，RNA聚合酶無校對功能。

RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板;②催化核苷酸透過聚合反應合成核酸;③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應;④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸;⑤按照鹼基配對原則忠實轉錄模板序列。