回覆列表
  • 1 # 任曉哲VLOG

    一:接種YEPD液體培養基中,30℃ 200rpm搖床培養10小時至對數生長期二:取5ml培養液3000 rpm離心5 min,棄上清,TE(1mM EDTA;10mM Tris-HCl, pH8.0)洗滌兩次三:加入500μl裂解混合液(1mM EDTA;10mM Tris-HCl, pH8.0;2% SDS),65℃水浴2h。3000rpm離心5min,吸取上清四:加入等體積緩衝液(苯酚:氯仿:異戊醇=25:24:1),混勻,12000rpm離心10min,取上清,重複兩到三次直到分界層沒有白色蛋白質五:回收上清液加入兩倍體積的無水乙醇(異丙醇),-20℃靜置20~30 min,12000rpm離心10min,棄上清,75%乙醇洗滌一次六:自然乾燥後溶於100μl的TE中,加1% 10mg/ml的RNA酶A的母液(10mg/mL,上海生工),37℃水浴處理30min後備用。注意:sds一定是2%濃度。以前嘗試過1%濃度,沒有提取成功。所以加大到2%,提取成功了。裂解時間可以適當延長。

  • 中秋節和大豐收的關聯?
  • 人體血量最多器官是什麼?為什麼?