酒精脫色為整個流程最關鍵的一步。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：（1）載玻片固定。在無菌操作條件下，用接種環挑取少量細菌於乾淨的載玻片上塗布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種並使其粘附固定。（2）草酸銨結晶紫染1分鐘。（3）自來水沖洗，去掉浮色。（4) 用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去多餘溶液。（5）用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。酒精脫色為整個流程最關鍵的一步。（6）用蕃紅染液或者沙黃復染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌即被區別開。擴充套件資料染色原理：該染色法所以能將細菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質，而且肽聚糖層較薄、交聯度低。故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的複合物易於滲出，結果細菌就被脫色，再經蕃紅復染後就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯度高，類脂質含量少，經脫色劑處理後反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色，呈現藍紫色。

酒精脫色為整個流程最關鍵的一步。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，具體操作方法是：（1）載玻片固定。在無菌操作條件下，用接種環挑取少量細菌於乾淨的載玻片上塗布均勻，在火焰上加熱以殺死菌種並使其粘附固定。（2）草酸銨結晶紫染1分鐘。（3）自來水沖洗，去掉浮色。（4) 用碘-碘化鉀溶液媒染1分鐘，傾去多餘溶液。（5）用中性脫色劑如乙醇（95%）或丙酮酸脫色30秒，革蘭氏陽性菌不被褪色而呈紫色，革蘭氏陰性菌被褪色而呈無色。酒精脫色為整個流程最關鍵的一步。（6）用蕃紅染液或者沙黃復染30秒，革蘭氏陽性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現紅色。革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌即被區別開。擴充套件資料染色原理：該染色法所以能將細菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質，而且肽聚糖層較薄、交聯度低。故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的複合物易於滲出，結果細菌就被脫色，再經蕃紅復染後就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯度高，類脂質含量少，經脫色劑處理後反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色，呈現藍紫色。