RNA轉染注意要點如下:
1.純化RNA
在轉染前要確認RNA的大小和純度。為得到高純度的RNA,推薦用玻璃纖維結合,洗脫或透過15-20%丙烯醯胺膠除去反應中多餘的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和鹽離子。注意:化學合成的RNA通常需要跑膠電泳純化(即PAGE膠純化)。
2.避免RNA酶汙染
微量的RNA酶將導致RNA實驗失敗。由於實驗環境中RNA酶普遍存在,如面板,頭髮,所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等,此保證實驗每個步驟不受RNA酶汙染非常重要。
3.健康的細胞培養物和嚴格的操作確保轉染的重複性
通常,健康的細胞轉染效率較高。此外,較低的傳代數能確保每次實驗所用細胞的穩定性。為了最佳化實驗,推薦用50代以下的轉染細胞,否則細胞轉染效率會隨時間明顯下降。
4.選擇合適的轉染試劑
針對RNA製備方法以及靶細胞型別的不同,選擇好的轉染試劑和最佳化的操作對RNA實驗的成功至關重要,如英格恩的Entranster-R試劑。
RNA轉染注意要點如下:
1.純化RNA
在轉染前要確認RNA的大小和純度。為得到高純度的RNA,推薦用玻璃纖維結合,洗脫或透過15-20%丙烯醯胺膠除去反應中多餘的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和鹽離子。注意:化學合成的RNA通常需要跑膠電泳純化(即PAGE膠純化)。
2.避免RNA酶汙染
微量的RNA酶將導致RNA實驗失敗。由於實驗環境中RNA酶普遍存在,如面板,頭髮,所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品等,此保證實驗每個步驟不受RNA酶汙染非常重要。
3.健康的細胞培養物和嚴格的操作確保轉染的重複性
通常,健康的細胞轉染效率較高。此外,較低的傳代數能確保每次實驗所用細胞的穩定性。為了最佳化實驗,推薦用50代以下的轉染細胞,否則細胞轉染效率會隨時間明顯下降。
4.選擇合適的轉染試劑
針對RNA製備方法以及靶細胞型別的不同,選擇好的轉染試劑和最佳化的操作對RNA實驗的成功至關重要,如英格恩的Entranster-R試劑。