首先告訴你，Tm值沒什麼用的，你要注意的是退火溫度，比如這是我做16S rDNA的程式，1）95度 10min（這個一般用94-95度，使DNA完全分開，這步一般固定）2）95度 30秒（94度、95度都可以，這步幾乎也是固定的）3）退火溫度 30-60秒（退火溫度你設計引物時會有告訴你的，要是是大片段，將程式建議的退火溫度減去5度，小片度就可以按照它給的溫度，注意，退火溫度是PCR的關鍵，所以一般需要摸索條件的）4）72度 延伸時間（這步固定，延伸時間與你P的片段大小和你的Taq酶有關，一般是1-2kb/min，也就是說你做1kb大小的片段就用30-60秒，依次類推）步驟2-4迴圈30次5）72度 5-10min6）15度 10min（此步可有可無）希望可以幫到你！！ Tm值在你設計引物的時候才會有用，引物的Tm值一般控制在55-60度, 儘可能保證上下游引物的Tm值一致,一般不超過2度. 如果引物中的G+C含量相對偏低,則可以使引物長度稍長,而保證一定的退火溫度.不知道你懂了沒？ 當然，我引物Tm值差5度的也有，照樣P的很好，呵呵。
首先告訴你，Tm值沒什麼用的，你要注意的是退火溫度，比如這是我做16S rDNA的程式，1）95度 10min（這個一般用94-95度，使DNA完全分開，這步一般固定）2）95度 30秒（94度、95度都可以，這步幾乎也是固定的）3）退火溫度 30-60秒（退火溫度你設計引物時會有告訴你的，要是是大片段，將程式建議的退火溫度減去5度，小片度就可以按照它給的溫度，注意，退火溫度是PCR的關鍵，所以一般需要摸索條件的）4）72度 延伸時間（這步固定，延伸時間與你P的片段大小和你的Taq酶有關，一般是1-2kb/min，也就是說你做1kb大小的片段就用30-60秒，依次類推）步驟2-4迴圈30次5）72度 5-10min6）15度 10min（此步可有可無）希望可以幫到你！！ Tm值在你設計引物的時候才會有用，引物的Tm值一般控制在55-60度, 儘可能保證上下游引物的Tm值一致,一般不超過2度. 如果引物中的G+C含量相對偏低,則可以使引物長度稍長,而保證一定的退火溫度.不知道你懂了沒？ 當然，我引物Tm值差5度的也有，照樣P的很好，呵呵。