除marker之外亮的部分是引物二聚體。作為昔日的pcr磚工，按我的經驗來看，這種豪無smear的條帶應該是啥都沒p出來。下面你需要檢查幾個部分：1. 酶和buffer是否過期or配套（聽起來很荒謬，但這是很多人都會犯的錯誤）2. 檢查引物與模版是否正確……（嗯、根本問題不能錯，尤其是右端引物在設計時有沒有反向互補，推薦傻瓜軟體snapgene）3. 檢查模板量是否過量，模板過多會導致無法p出來，建議將模板進行10的梯度稀釋，做梯度pcr3. 檢查引物的結構，ncbi中有相關的工具，雖然我的經驗是不論結構多差只要和模板有10bp以上的重複序列都能p出來。4. 上述都確定完沒問題依然p不出來請降低退火溫度，嘗試進行溫度梯度pcr。5. 加少量鎂離子6. 最後不行的話……把taq換成primestar吧……高保真酶，貴，好用。taq酶p不出來的很多奇怪的序列primestar一上就靈……最後，你加反應體系的時候攪勻離心了麼……暴力實驗的時候我會拿槍頭進去攪攪…防止酶和dntp分佈不均……這個問題為什麼會出現在我的時間線上呢？我為什麼會來回答呢？我明明已經……
除marker之外亮的部分是引物二聚體。作為昔日的pcr磚工，按我的經驗來看，這種豪無smear的條帶應該是啥都沒p出來。下面你需要檢查幾個部分：1. 酶和buffer是否過期or配套（聽起來很荒謬，但這是很多人都會犯的錯誤）2. 檢查引物與模版是否正確……（嗯、根本問題不能錯，尤其是右端引物在設計時有沒有反向互補，推薦傻瓜軟體snapgene）3. 檢查模板量是否過量，模板過多會導致無法p出來，建議將模板進行10的梯度稀釋，做梯度pcr3. 檢查引物的結構，ncbi中有相關的工具，雖然我的經驗是不論結構多差只要和模板有10bp以上的重複序列都能p出來。4. 上述都確定完沒問題依然p不出來請降低退火溫度，嘗試進行溫度梯度pcr。5. 加少量鎂離子6. 最後不行的話……把taq換成primestar吧……高保真酶，貴，好用。taq酶p不出來的很多奇怪的序列primestar一上就靈……最後，你加反應體系的時候攪勻離心了麼……暴力實驗的時候我會拿槍頭進去攪攪…防止酶和dntp分佈不均……這個問題為什麼會出現在我的時間線上呢？我為什麼會來回答呢？我明明已經……