提取新鮮心肌組織細胞內線粒體的方案:心肌組織切碎後在4 ℃介質(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中製備心肌組織勻漿。勻漿經750g、離心10 min後留上清,以9000 g離心20 min 後留沉澱,重新懸浮後以9000 g再離心20 min,棄上清得線粒體.全部操作於4 ℃進行。培養細胞提取線粒體.細胞棄去培養液後,用細胞收集液作用2到3 min,用scraper,將細胞收集起來,6000 g離心15 min。棄上清,之後加細胞勻漿液,用勻漿器或手動勻漿管勻漿,將裝有勻漿液的離心管配平後放入普通離心機,以2500 rpm,離心15 min,緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存於有冰塊的燒杯中.以17000 rpm離心20 min,棄上清,留取沉澱物。加入0.25mol/L蔗糖與0.003 mol/L氯化鈣液l ml,用吸管吹打成懸液,以17000 rpm離心20 min,將上清吸入另一試管中,留取沉澱物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖與0.003mol/L氯化鈣溶液混勻成懸液.即得線粒體。
提取新鮮心肌組織細胞內線粒體的方案:心肌組織切碎後在4 ℃介質(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中製備心肌組織勻漿。勻漿經750g、離心10 min後留上清,以9000 g離心20 min 後留沉澱,重新懸浮後以9000 g再離心20 min,棄上清得線粒體.全部操作於4 ℃進行。培養細胞提取線粒體.細胞棄去培養液後,用細胞收集液作用2到3 min,用scraper,將細胞收集起來,6000 g離心15 min。棄上清,之後加細胞勻漿液,用勻漿器或手動勻漿管勻漿,將裝有勻漿液的離心管配平後放入普通離心機,以2500 rpm,離心15 min,緩緩取上清液,移入高速離心管中,保存於有冰塊的燒杯中.以17000 rpm離心20 min,棄上清,留取沉澱物。加入0.25mol/L蔗糖與0.003 mol/L氯化鈣液l ml,用吸管吹打成懸液,以17000 rpm離心20 min,將上清吸入另一試管中,留取沉澱物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖與0.003mol/L氯化鈣溶液混勻成懸液.即得線粒體。