凍存和復甦的原則：慢凍快融

當細胞冷到零度以下，可以產生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，並在細胞內形成冰晶。如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內不致產生大的冰晶；相反，結晶就大，大結晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復甦過程應快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。儲存細胞的復甦方法1. 快速解凍凍存細胞從液氮中取出後，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1 分鐘內全部融化（不要超過3 分鐘）。2. 解凍後的細胞可直接接種到含完全生長培養液的細胞培養瓶中直接進行培養，24小時後再用新鮮完全培養液替換舊培養液，以去除DMSO。3. 如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍後的細胞應先透過離心去除冷凍保護劑，然後再接種到含完全生長培養液的培養瓶中。針對細胞復甦，一點經驗總結 ：1. 可以提前把需要的體積的培養液放到培養瓶裡，擰鬆瓶蓋，放到孵箱裡半小時到1小時；2. 為防止凍存管在升溫時爆裂等，可以在放入水浴前就實現在超淨臺裡把蓋子擰鬆一下然後再擰上；3. 水浴溫度40℃應該也沒問題，但正規的protocol上從來都只說37℃。