在研究格爾德黴素(GDM)生物合成的過程中利用基因阻斷技術分別阻斷 GDM 生物合成的起始基因3-氨基-5-羥基苯甲酸(AHBA)基因、含 AHBA 基因並與之相連的聚酮合酶(PKS)基因簇以及 GDM 生物合成相關的 PKS 和 PKS 後修飾基因簇 CT-PKS 獲得3個 GDM 基因阻斷變株。為了比較分析他們的次級代謝產物,採用高效液相色譜質譜法測定發酵液組分。方法:發酵液經過乙酸乙酯提取後用反相高效液相色譜分析。分析柱為迪馬公司 Diamonsil~(TM)(鑽石)C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm);流動相是40%～100%甲醇,30 min 梯度洗脫;流速1 mL·min~(-1);二極體陣列檢測器(DAD),檢測波長304nm。利用電噴霧質譜(ESI)透過正負離子掃描獲得相應化合物的相對分子質量資訊;利用質譜的源內裂解技術獲得相應化合物的結構資訊。結果:檢測發現,阻斷2個不同的 GDM 生物合成基因以後主要產生2個不同於 GDM 的化合物。結論:該方法可快速、準確地對基因工程變株發酵新產物進行早期鑑別,指引後續的化學分離,並用於其他 GDM 基因阻斷變株產物的定性
在研究格爾德黴素(GDM)生物合成的過程中利用基因阻斷技術分別阻斷 GDM 生物合成的起始基因3-氨基-5-羥基苯甲酸(AHBA)基因、含 AHBA 基因並與之相連的聚酮合酶(PKS)基因簇以及 GDM 生物合成相關的 PKS 和 PKS 後修飾基因簇 CT-PKS 獲得3個 GDM 基因阻斷變株。為了比較分析他們的次級代謝產物,採用高效液相色譜質譜法測定發酵液組分。方法:發酵液經過乙酸乙酯提取後用反相高效液相色譜分析。分析柱為迪馬公司 Diamonsil~(TM)(鑽石)C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm);流動相是40%～100%甲醇,30 min 梯度洗脫;流速1 mL·min~(-1);二極體陣列檢測器(DAD),檢測波長304nm。利用電噴霧質譜(ESI)透過正負離子掃描獲得相應化合物的相對分子質量資訊;利用質譜的源內裂解技術獲得相應化合物的結構資訊。結果:檢測發現,阻斷2個不同的 GDM 生物合成基因以後主要產生2個不同於 GDM 的化合物。結論:該方法可快速、準確地對基因工程變株發酵新產物進行早期鑑別,指引後續的化學分離,並用於其他 GDM 基因阻斷變株產物的定性