瓊脂糖凝膠具有網狀結構，網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。核酸分子在瓊脂糖凝膠中電泳時，具有電荷效應和分子篩效應，泳動時受到阻力。瓊脂糖凝膠的濃度需要根據你的目的條帶長度來調整，通常在濃度0.5~2%之間。低濃度膠用來進行大片段核酸電泳，高濃度膠用來進行小片段核酸分析。所以瓊脂糖濃度影響核酸分子“跑”的速度。在我們實驗室，目的條帶一般不超過1kb，我們用的是1%的膠。至於條帶模糊不清，彌散，可能是以下原因1）電泳緩衝液多次使用後，離子濃度較低，pH值上升，緩衝效能下降，可能出現條帶模糊和不規則遷移的現象。2）加樣量太多可能導致條帶模糊，加樣量太少則可能條帶弱甚至缺失。3）電壓和溫度過高，可能導致條帶模糊或遷移。4）樣品中含鹽太高和含雜誌蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。5）核酸染色劑的穩定性及用量問題。實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（EB），染色效果好，穩定性差，有毒。在凝膠溫度50~60℃時加EB。附之前實驗的圖，Marker特別淡是因為Marker時間太久了，條帶有點模糊，後來換了新的緩衝液就好了很多。就醬，分子生物學研究狗一枚，歡迎探討指正~
瓊脂糖凝膠具有網狀結構，網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。核酸分子在瓊脂糖凝膠中電泳時，具有電荷效應和分子篩效應，泳動時受到阻力。瓊脂糖凝膠的濃度需要根據你的目的條帶長度來調整，通常在濃度0.5~2%之間。低濃度膠用來進行大片段核酸電泳，高濃度膠用來進行小片段核酸分析。所以瓊脂糖濃度影響核酸分子“跑”的速度。在我們實驗室，目的條帶一般不超過1kb，我們用的是1%的膠。至於條帶模糊不清，彌散，可能是以下原因1）電泳緩衝液多次使用後，離子濃度較低，pH值上升，緩衝效能下降，可能出現條帶模糊和不規則遷移的現象。2）加樣量太多可能導致條帶模糊，加樣量太少則可能條帶弱甚至缺失。3）電壓和溫度過高，可能導致條帶模糊或遷移。4）樣品中含鹽太高和含雜誌蛋白均可以產生條帶模糊和條帶缺失的現象。5）核酸染色劑的穩定性及用量問題。實驗室常用的核酸染色劑是溴化乙錠（EB），染色效果好，穩定性差，有毒。在凝膠溫度50~60℃時加EB。附之前實驗的圖，Marker特別淡是因為Marker時間太久了，條帶有點模糊，後來換了新的緩衝液就好了很多。就醬，分子生物學研究狗一枚，歡迎探討指正~