提取DNA需要在鹼性條件下的原因如下:
在酸性條件下,DNA容易被水解,但最不穩定是的嘌呤與脫氧核糖之間的糖苷鍵.在鹼性條件下,RNA由於2"-OH的存在,比DNA要容易水解得多,DNA在鹼性條件下相對穩定.
DNA提取方法:
酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
甲醯胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在介面輕攪,DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。
異丙醇沉澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)
表面活性劑快速製備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉澱或透析。
加熱法快速製備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然後離心後取上清,可用於PCR反應。
鹼變性快速製備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。
提取DNA需要在鹼性條件下的原因如下:
在酸性條件下,DNA容易被水解,但最不穩定是的嘌呤與脫氧核糖之間的糖苷鍵.在鹼性條件下,RNA由於2"-OH的存在,比DNA要容易水解得多,DNA在鹼性條件下相對穩定.
DNA提取方法:
酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
甲醯胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在介面輕攪,DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。
異丙醇沉澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)
表面活性劑快速製備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉澱或透析。
加熱法快速製備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然後離心後取上清,可用於PCR反應。
鹼變性快速製備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。