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  • 1 # 使用者2033590184843

    PCR技術是DNA擴增技術,它能在比較短的時間內產生大量的DNA。在獲取目的基因後才使用PCR技術。 獲得目的基因的方法:

    一、構建基因文庫 提取總DNA。 用限制性內切酶將總DNA切成小片段,連到質粒或噬菌體載體上,把這些質粒轉化到細菌,隨著細菌繁殖而複製,這個過程又稱為基因克隆(geneclone) 將總DNA包含的基因組各片段分別克隆在質粒或噬菌體載體上,便構成了該生物的基因文庫(genelibrary)。

    二、反轉錄人工合成互補DNA 細胞核中轉錄的mRNA,已經加工去除內含子,只有外顯子(編碼蛋白質的序列),比構建基因文庫優越,因此,先從細胞中提取所需的mRNA。 以mRNA為模板,在逆轉錄酶的作用下,合成互補的DNA片段(complementaryDNA,cDNA),在逆轉錄完成時,mRNA被降解。在大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段的作用下,再以第一條DNA為模板,合成另一條互補DNA鏈。 優點在細胞分化各階段細胞往往轉錄出特異的編碼特殊蛋白質的mRNA。因此,用cDNA方法獲取的DNA片段往往是具有特定功能的目的基因。

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