在色譜柱耐受的範圍內，流動相pH值的改變影響最大的是色譜峰的保留時間，保留時間改變進而峰形也隨之改變。在反相色譜條件下，分析的物質在流動相中處於完全解離狀態時，出峰最快；而處於全部非解離狀態下，出峰最慢；有部分解離時，峰形應該是比較差的。

採用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱鹼（7≤pKa≤8）樣品時，透過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，並改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對於弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小於弱酸會計考試的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；對弱鹼，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和1%醋酸溶液；分析弱鹼樣品時，通常在流動相中加入少量弱鹼，常用50mmol/L磷酸鹽緩衝液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流動相中加入有機胺可以減弱鹼性溶質與殘餘矽醇基的相互作用，減輕或消除峰拖尾現象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑。