利用雙熒光素酶報告系統探討活化T細胞核因子（NFAT）能否調控常見組成性啟動子CMV,SV40和TK,為不同條件下選擇合適雙熒光報告系統內參提供依據。方法：用限制性內切酶BglⅡ和HindⅢ分別從質粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK啟動子,克隆至pGL3-basic載體中,構建成pCMV-Luc和pTK-Luc載體。將構建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control（SV40啟動子驅動）,分別與SV40（pBIND）和TK（pRL-TK）兩種啟動子驅動的兩種內參質粒共轉染入HEK293細胞;觀察過表達組成性活化NFAT後相對熒光素酶活性讀數的改變。結果：成功構建了pCMV-Luc和pTK-Luc質粒,熒光素酶活性檢測發現,常見組成性啟動子SV40啟動子對過表達組成性活化的NFAT存在一定的反應。結論：T細胞活化過程中重要的轉錄因子NFAT能夠調控SV40啟動子活性;表明常見組成性啟動子SV40並非真正、絕對的組成性不變。因此,在熒光素酶報告系統內參選擇時需要充分考慮該問題,本研究為合理選擇內參質粒提供了一個可行策略。
利用雙熒光素酶報告系統探討活化T細胞核因子（NFAT）能否調控常見組成性啟動子CMV,SV40和TK,為不同條件下選擇合適雙熒光報告系統內參提供依據。方法：用限制性內切酶BglⅡ和HindⅢ分別從質粒pCDNA3.1和pRL-TK中切下CMV和TK啟動子,克隆至pGL3-basic載體中,構建成pCMV-Luc和pTK-Luc載體。將構建pCMV-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control（SV40啟動子驅動）,分別與SV40（pBIND）和TK（pRL-TK）兩種啟動子驅動的兩種內參質粒共轉染入HEK293細胞;觀察過表達組成性活化NFAT後相對熒光素酶活性讀數的改變。結果：成功構建了pCMV-Luc和pTK-Luc質粒,熒光素酶活性檢測發現,常見組成性啟動子SV40啟動子對過表達組成性活化的NFAT存在一定的反應。結論：T細胞活化過程中重要的轉錄因子NFAT能夠調控SV40啟動子活性;表明常見組成性啟動子SV40並非真正、絕對的組成性不變。因此,在熒光素酶報告系統內參選擇時需要充分考慮該問題,本研究為合理選擇內參質粒提供了一個可行策略。