酵母感受態細胞的製備(1)從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 mlYPD液體培養基,30℃,250 rpm培養過夜;(2)測定過夜培養物的OD600值為3.0~5.0之間;(3)將10 ml YPD過夜培養物稀釋至OD600值為0.2~0.4;(4)在28~30℃搖床中繼續培養3~6hr,使其OD600值達到0.6~1.0;(5)於室溫1500g離心5 min收集酵母細胞,棄上清;用10ml洗液洗酵母細胞,隨後於室溫1500g離心5 min離心收集細胞,棄上清;(7)用1 ml TE/LiAc重懸酵母細胞,以每管50μl分裝。 酵母細胞的轉化(1)取50μl感受態細胞,再加入待轉質粒各2μl,混勻;(2)加入500μl 轉化用溶液(PEG/LiAc,二甲亞碸),彈擊管壁混勻;(3)30℃水浴1hr,隔15min彈擊管壁混勻;(4)加入1毫升YPD培養液,30℃搖床培養1小時(5)3500g離心5 min ,留沉澱,棄上清;沉澱用150μl TE重懸,塗相應的SD平板;將平板倒置於30℃培養。
酵母感受態細胞的製備(1)從YPD平板上挑取一個新鮮的釀酒酵母EBY100單克隆至10 mlYPD液體培養基,30℃,250 rpm培養過夜;(2)測定過夜培養物的OD600值為3.0~5.0之間;(3)將10 ml YPD過夜培養物稀釋至OD600值為0.2~0.4;(4)在28~30℃搖床中繼續培養3~6hr,使其OD600值達到0.6~1.0;(5)於室溫1500g離心5 min收集酵母細胞,棄上清;用10ml洗液洗酵母細胞,隨後於室溫1500g離心5 min離心收集細胞,棄上清;(7)用1 ml TE/LiAc重懸酵母細胞,以每管50μl分裝。 酵母細胞的轉化(1)取50μl感受態細胞,再加入待轉質粒各2μl,混勻;(2)加入500μl 轉化用溶液(PEG/LiAc,二甲亞碸),彈擊管壁混勻;(3)30℃水浴1hr,隔15min彈擊管壁混勻;(4)加入1毫升YPD培養液,30℃搖床培養1小時(5)3500g離心5 min ,留沉澱,棄上清;沉澱用150μl TE重懸,塗相應的SD平板;將平板倒置於30℃培養。