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  • 1 # 使用者5010666567480

    你好,蛋白儲存是個比較棘手的問題,就我的理解來講:

    蛋白的儲存很大程度上依賴於蛋白本身的結構穩定性,其次和儲存條件最佳化有關;

    儘量避免蛋白的反覆凍融,這會對蛋白的結構和活性造成破壞;

    像你說到的第二天就要用,根本沒必要放在-70℃低溫,一般來講,儘量安排好實驗週期,在3天內用完蛋白(4℃儲存)是理想條件;

    如果不得不儲存,要分裝,留下馬上就用的放在4℃,其他放低溫,每次取1只;如果有凍幹機,凍成乾粉再放到-70比液態低溫更好,再溶解也會好很多(但很多蛋白還是會有失活問題);

    關於保護劑,如果蛋白穩定性不強,一般會加甘油(5%-50%濃度)和疊氮鈉(抑菌),這樣一來,取出時,不得不做透析或脫鹽,以去除甘油和疊氮鈉,會帶來損失,相比而言,凍乾粉就好很多;

    關於咪唑的去除問題,如果確信咪唑的存在對你後續的實驗沒影響,可以不去;但實際上,很多實驗都會受到咪唑的影響,或者說一旦實驗有疑問,你就無法判定是否是因為咪唑,所以建議你去咪唑,去咪唑的方式包括:透析、濃縮管離心、脫鹽柱。個人認為,去除效率、最省時、蛋白回收率最高的辦法是脫鹽柱。

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