1.取決於樣品的性質。一般用矽膠柱，但矽膠柱帶弱酸性，有些對酸很敏感的化合物需要過氧化鋁柱。矽膠可選用200-300目或300-400目的細矽膠。目數越高，理論上分離效果越好，但吸附強，過起來會更慢一點。

2.洗脫劑和溶解樣品的溶劑可以相同，也可以不同，只要能溶解樣品並且沸點不要太高，DMF，DMSO就不要用了（除非過反相柱）。對一般實驗室常用的正相柱來說，先用良溶劑將樣品溶解，加樣品量1.5-2倍的粗矽膠（100-200目）拌樣，旋蒸上儘量把溶劑旋幹（尤其對於極性較大的溶劑）。取合適柱子，加樣品量20倍的細矽膠，加入石油醚或正己烷拌成糊狀，倒入柱子，加適量石油醚或正己烷，用軟棒敲出氣泡，把液麵壓至矽膠面相齊，注意不要壓幹。把拌好粗矽膠的樣品倒入柱子，上面覆蓋一層石英砂或無水硫酸鈉。柱子就算裝好了。

3.洗脫劑的極性選擇取決於樣品在TLC板上的RF值。常用的洗脫劑體系：乙酸乙酯/石油醚，二氯甲烷/甲醇。用可以使每個點的rf值在0.2左右的極性來依次過出各個點。因此洗脫劑和你所用溶解樣品的溶劑沒有關係，只和你樣品的極性有關。