關鍵詞：腦組織 目的：熟練進行腦組織蛋白質的提取 背景知識：無 原理：無 具體內容： 腦組織總蛋白質提取方法 1．將低溫儲存的樣本稱重。 2．加入裂解液。樣本與組織比例=1：3~3.5 w/v，一般為150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制劑。可利用振盪器、加樣器，將組織塊吹散。 3．液氮中凍融3~4次。1min/time，室溫中自然融化。 4．超聲破碎。將含裂解液的EP tube埋入冰中，超聲3~4sec/time，強度為最大強度的3/4。間隔10幾sec。至溶液透明。小心空泡效應。 5．加入Dnase I，Rnase A。10μg/μl，5μl。4℃ 30min。 6．4℃ 14000g/min 離心25~30mins。 7．提上清，分裝。儲存。 細胞裂解液 Tris （40mM） 24.2mg 48.4 mg 96.8mg 尿素(urea) (7M) 2.102g 4.204g 8.408g 硫脲（thiourea） (2M) 0.761g 1.522g 3.044g 4% CHAPS 0.2g 0.4g 0.8g 1%二硫蘇糖醇(DTT) 0.05g 0.1g 0.2g 乙二胺四乙酸二鈉 1.86mg 3.72mg 7.44mg (EDTA) (1mM) 加去離子水至 5 ml 10 ml 20 ml
關鍵詞：腦組織 目的：熟練進行腦組織蛋白質的提取 背景知識：無 原理：無 具體內容： 腦組織總蛋白質提取方法 1．將低溫儲存的樣本稱重。 2．加入裂解液。樣本與組織比例=1：3~3.5 w/v，一般為150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制劑。可利用振盪器、加樣器，將組織塊吹散。 3．液氮中凍融3~4次。1min/time，室溫中自然融化。 4．超聲破碎。將含裂解液的EP tube埋入冰中，超聲3~4sec/time，強度為最大強度的3/4。間隔10幾sec。至溶液透明。小心空泡效應。 5．加入Dnase I，Rnase A。10μg/μl，5μl。4℃ 30min。 6．4℃ 14000g/min 離心25~30mins。 7．提上清，分裝。儲存。 細胞裂解液 Tris （40mM） 24.2mg 48.4 mg 96.8mg 尿素(urea) (7M) 2.102g 4.204g 8.408g 硫脲（thiourea） (2M) 0.761g 1.522g 3.044g 4% CHAPS 0.2g 0.4g 0.8g 1%二硫蘇糖醇(DTT) 0.05g 0.1g 0.2g 乙二胺四乙酸二鈉 1.86mg 3.72mg 7.44mg (EDTA) (1mM) 加去離子水至 5 ml 10 ml 20 ml