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[精品]黃酮含量的測定方法
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黃酮含量的測定方法 1、 1） ① 對照品製備： 精密稱取蘆丁對照品 20.8mg， 置於 100ml 容量瓶中， 加 70%乙醇使溶解並稀釋至刻度， 搖勻。 ② 樣品溶液製備 精密稱取樣品 0.50g， 精密加入 70%乙醇 50ml， 稱定重量， 超聲處理 30 分鐘，稱定重量， 用 70%乙醇補足減失重量， 即得。 ③ 標準曲線的製備 精密稱取對照品溶液 0.0、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0ml， 分別置於 25ml 比色管中， 加 70%乙醇 10ml， 加 5%亞硝酸鈉溶液 1ml， 搖勻， 放置 6 分鐘， 加 1mol/L氫氧化鈉溶液 10ml， 加 70%乙醇置刻度， 搖勻， 放置 15 分鐘。 各取 10ml置於 50ml 容量瓶中， 用 70%乙醇稀釋至刻度。 在 510nm 的波長下測定吸光度。 2） ①樣品溶液的製備： 分別精確稱取 80℃恆溫乾燥的樣品用 50%甲醇迴流提取， 料液比 1： 15,提取兩次， 每次 30min， 將兩次提取液合併濃縮至一定體積， 用 30%甲醇定容至 50ml容量瓶中。 從其中取出 12ml 溶液放入 100ml 容量瓶中， 稀釋至刻度， 再從 100ml容量瓶中取出 1.5ml 溶液， 放至 10ml 容量瓶中， 定容， 為待測樣品液Ⅰ a 和Ⅱ a。 ②最大吸收波長的選擇： 分別作樣品液Ⅰ a、 Ⅱ a 及蘆丁標準品的吸收曲線， 均在 350 nm 處有一強吸收， 因此選擇 350 nm 為測定波長。 ③標準曲線的制定： 精密稱取蘆丁對照品 10.3mg， 用少量 30%乙醇溶解後， 轉移至 50ml 容量瓶， 用蒸餾水定容至刻度。 分別精密量取 2ml、 3ml、 4ml、 5ml、 6ml 蘆丁溶液置於 100ml容量瓶中， 於 350 nm 波長處測定吸光值， 以蘆丁空白為參比， 以蘆丁濃度為橫座標， 以吸光度為縱座標繪製標準曲線， 提示在 4.12～12.36mg／ 103ml 濃度之間， 吸光度值與濃度呈現良好的線性關係。 ④含量測定結果： 分別吸取 2． 2． 1 中Ⅰ a 和Ⅱ a 待測樣品液各適量於石英比色池中， 按標準蘆丁一吸光度測定法， 以樣液空白參比， 於 350nm 波長下測定吸光值， 計算各提取液中總黃酮含量。 計算公式為:樣品總黃酮含量(%)=0.03692(A+0.1644)/W。 注:上式為透過迴歸方程轉化而來， 式中 A 為測得樣品液的吸光度值， W 為稱樣量。 2、 紫外分光光度法 黃酮類化合物由於均具有 α－苯基色原酮的基本結構， 羰基與二個芳香環形成兩個較強的共軛系統， 對紫外光區相應有兩個區域的特徵吸收。 吸收帶 I 在較長波長（330～380nm）； 吸收帶 II 在較短波長（240～280nm）。經分離純化的待測樣品中主要含有黃酮類成分， 其紫外光譜中有兩個特徵吸收帶， 因此可以選用其中主要的黃酮成分作為對照品測定總黃酮含量，例如 2005 版中國藥典， 淫羊藿中總黃酮的含量測定就是採用淫羊藿苷為對照品在 270nm 處測定淫羊藿總黃酮含量。 用紫外分光光度法測定...
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黃酮含量的測定方法 1、 1） ① 對照品製備： 精密稱取蘆丁對照品 20.8mg， 置於 100ml 容量瓶中， 加 70%乙醇使溶解並稀釋至刻度， 搖勻。 ② 樣品溶液製備 精密稱取樣品 0.50g， 精密加入 70%乙醇 50ml， 稱定重量， 超聲處理 30 分鐘，稱定重量， 用 70%乙醇補足減失重量， 即得。 ③ 標準曲線的製備 精密稱取對照品溶液 0.0、 1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0ml， 分別置於 25ml 比色管中， 加 70%乙醇 10ml， 加 5%亞硝酸鈉溶液 1ml， 搖勻， 放置 6 分鐘， 加 1mol/L氫氧化鈉溶液 10ml， 加 70%乙醇置刻度， 搖勻， 放置 15 分鐘。 各取 10ml置於 50ml 容量瓶中， 用 70%乙醇稀釋至刻度。 在 510nm 的波長下測定吸光度。 2） ①樣品溶液的製備： 分別精確稱取 80℃恆溫乾燥的樣品用 50%甲醇迴流提取， 料液比 1： 15,提取兩次， 每次 30min， 將兩次提取液合併濃縮至一定體積， 用 30%甲醇定容至 50ml容量瓶中。 從其中取出 12ml 溶液放入 100ml 容量瓶中， 稀釋至刻度， 再從 100ml容量瓶中取出 1.5ml 溶液， 放至 10ml 容量瓶中， 定容， 為待測樣品液Ⅰ a 和Ⅱ a。 ②最大吸收波長的選擇： 分別作樣品液Ⅰ a、 Ⅱ a 及蘆丁標準品的吸收曲線， 均在 350 nm 處有一強吸收， 因此選擇 350 nm 為測定波長。 ③標準曲線的制定： 精密稱取蘆丁對照品 10.3mg， 用少量 30%乙醇溶解後， 轉移至 50ml 容量瓶， 用蒸餾水定容至刻度。 分別精密量取 2ml、 3ml、 4ml、 5ml、 6ml 蘆丁溶液置於 100ml容量瓶中， 於 350 nm 波長處測定吸光值， 以蘆丁空白為參比， 以蘆丁濃度為橫座標， 以吸光度為縱座標繪製標準曲線， 提示在 4.12～12.36mg／ 103ml 濃度之間， 吸光度值與濃度呈現良好的線性關係。 ④含量測定結果： 分別吸取 2． 2． 1 中Ⅰ a 和Ⅱ a 待測樣品液各適量於石英比色池中， 按標準蘆丁一吸光度測定法， 以樣液空白參比， 於 350nm 波長下測定吸光值， 計算各提取液中總黃酮含量。 計算公式為:樣品總黃酮含量(%)=0.03692(A+0.1644)/W。 注:上式為透過迴歸方程轉化而來， 式中 A 為測得樣品液的吸光度值， W 為稱樣量。 2、 紫外分光光度法 黃酮類化合物由於均具有 α－苯基色原酮的基本結構， 羰基與二個芳香環形成兩個較強的共軛系統， 對紫外光區相應有兩個區域的特徵吸收。 吸收帶 I 在較長波長（330～380nm）； 吸收帶 II 在較短波長（240～280nm）。經分離純化的待測樣品中主要含有黃酮類成分， 其紫外光譜中有兩個特徵吸收帶， 因此可以選用其中主要的黃酮成分作為對照品測定總黃酮含量，例如 2005 版中國藥典， 淫羊藿中總黃酮的含量測定就是採用淫羊藿苷為對照品在 270nm 處測定淫羊藿總黃酮含量。 用紫外分光光度法測定...
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