清洗與消毒是組織培養實驗的第一步，是組織培養中工作量最大，也是最基本的步驟。體外培養細胞所使用的各種玻璃或塑膠器皿對清潔和無菌的要求程度很高。細胞養不好與清洗不徹底有很大關係。清洗後的玻璃器皿，不僅要求乾淨透明，無油跡，而且不能殘留任何物質。如有毒的化學物質，哪怕殘留0．1顎，也可能影響細胞生長。滅菌手段的選擇十分重要，對不同的物品需採用不同的滅菌方法。假如選用的方法不對，即使達到了無菌卻使被滅菌藥品喪失了營養價值、生物學特性或其他使用價值也不行。以下在每種滅菌步驟中都介紹其使用範圍。
***材料：無臭氧型紫外燈，微孔濾膜(直徑25)：孔徑為0．22μm，微孔濾膜(直徑90)：孔徑為0．22 μm，過濾器(直徑25)。
***藥品：70％或75％酒精，0．1％新潔爾滅，煤酚皂溶液(來蘇兒水)，0．5％過氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高錳酸鉀，NaOH，鹽酸，重鉻酸鉀，濃硫酸(工業)，DEPC水[體積分數0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
***儀器(請參看)：超淨臺，乾燥箱，高壓鍋，過濾器，過濾泵。
(一)清洗
1．新玻璃器皿的清洗先用自來水刷洗，再浸泡5％稀鹽酸以中和玻璃表面的鹼性物質和其他有害物質。
2．使用過的玻璃器皿的清洗
(1)使用過的培養用品應立即浸入清水，避免乾涸難洗。
(2)用洗滌劑清洗玻璃器皿，自來水清洗數遍，倒置自然乾燥。
(3)浸酸性洗液過夜。
(4)從酸性洗液撈出後自來水沖洗10．15次去除殘餘酸液，蒸餾水涮洗3次，倒置烘乾。
(5)包裝(牛皮紙或一般紙)。 (6)高壓(15磅20 min)或乾熱(160℃2 h)滅菌(見(二)消毒與滅菌)。
(7)貯存備用。
3．用於RNA提取的玻璃器皿的清洗 用於RNA操作的物品需經特殊處理以徹底去除RNA酶。
(1)洗滌劑清洗玻璃器皿，自來水清洗數遍。倒置自然乾燥。
(2)浸酸性洗液過夜。
(3)從酸性洗液撈出後，自來水沖洗10—15次去除殘餘酸液，蒸餾水涮洗3次，倒置烘乾。
(4)0．2 mol／L NaOH浸泡半日。
(5)清洗5～10次，蒸餾水涮洗3次，倒置涼幹。勿使面板直接接觸到被洗滌的物品(戴手套操作)。
(6)錫紙包裝封口。
(7)乾熱滅菌180℃ 5—8 h或溼熱滅菌15磅以上40 min。注意：自第5步以後均應戴手套操作，勿用普通紙包裝待滅菌物品，以免紙被燒焦。
4．膠塞的處理
(1)新膠塞應先用清水清洗之後再用0．2％NaOH煮沸lO-20 min。
(2)自來水清洗10次。
(3)再用1％稀鹽酸浸泡30 min。
(4)自來水清洗10次，蒸餾水涮洗3次。晾乾，高壓滅菌(見(二)消毒與滅菌)。舊膠塞不必用酸鹼處理可直接用洗滌劑煮沸和清洗數次，過蒸餾水，晾乾，包裝並高壓滅菌後，便可使用。
5．塑膠製品的清洗
(1)用洗滌劑清洗，自來水沖洗數遍。
(2)次強酸洗液浸泡2—6 h。
(3)自來水沖洗10次以上，蒸餾水涮洗3次。
(4)浸泡在70％乙醇1 h以上，備用。
(5)臨用前從70％乙醇中取出，在超淨臺內紫外線照射1 h左右方可使用。也可在洗淨後不經70％浸泡，而用塑膠袋包好，成箱地去照射6OCo滅菌。
6．加樣器頭(Tip)和離心小管(Tube)的清洗
(1)新的中國產Tip和Tube如用於非RNA提取時可用蒸餾水涮洗，晾乾，高壓滅菌後可以使用(方法同塑膠製品)。
(2)當新的中國產Tip和Tube用於RNA提取時，則用蒸餾水涮洗後再用DEPC水(抑制RNA酶)浸泡過夜後晾乾，高壓滅菌後方可使用。
(3)使用過的Tip和Tube用完後應浸泡在0．2 mol／L NaOH或0．2 mol／L鹽酸溶液中。用清水洗過，再用較稀的洗滌劑液在超聲波清洗儀中超聲處理30 min。自來水清洗5-6遍後，再用次強洗液浸泡2—24 h。自來水逐個充分沖洗並用蒸餾水涮洗，晾乾，放入Tip架或飯盒內高壓滅菌。
7．洗液的配製常用的洗液是硫酸一重鉻酸鉀溶液。洗液可根據需要配製成不同的強度(見下表)。
常用的洗液配方
成分
強酸洗液
次強酸洗液
重鉻酸鉀
63 g
3 150 g
120 g
6 000 g
濃硫酸(工業)
1 000 mL
50 000 mL
200 mL
10 000 mL
蒸餾水
lO 000 mL
配製方法：
(1)將重鉻酸鉀放人大燒杯中，加入蒸餾水放在石棉網上加熱至沸騰並攪拌，使重鉻酸鉀充分溶解。
(2)將重鉻酸鉀液倒入酸缸中，然後緩慢加入硫酸並用一長玻璃棒不斷攪拌，充分混合溶解。操作時務必注意安全，穿戴好耐酸手套和圍裙，防止洗液濺到面板和衣物上。萬一不慎濺到面板上應立即用大量清水沖洗。
清洗與消毒是組織培養實驗的第一步，是組織培養中工作量最大，也是最基本的步驟。體外培養細胞所使用的各種玻璃或塑膠器皿對清潔和無菌的要求程度很高。細胞養不好與清洗不徹底有很大關係。清洗後的玻璃器皿，不僅要求乾淨透明，無油跡，而且不能殘留任何物質。如有毒的化學物質，哪怕殘留0．1顎，也可能影響細胞生長。滅菌手段的選擇十分重要，對不同的物品需採用不同的滅菌方法。假如選用的方法不對，即使達到了無菌卻使被滅菌藥品喪失了營養價值、生物學特性或其他使用價值也不行。以下在每種滅菌步驟中都介紹其使用範圍。
***材料：無臭氧型紫外燈，微孔濾膜(直徑25)：孔徑為0．22μm，微孔濾膜(直徑90)：孔徑為0．22 μm，過濾器(直徑25)。
***藥品：70％或75％酒精，0．1％新潔爾滅，煤酚皂溶液(來蘇兒水)，0．5％過氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高錳酸鉀，NaOH，鹽酸，重鉻酸鉀，濃硫酸(工業)，DEPC水[體積分數0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
***儀器(請參看)：超淨臺，乾燥箱，高壓鍋，過濾器，過濾泵。
(一)清洗
1．新玻璃器皿的清洗先用自來水刷洗，再浸泡5％稀鹽酸以中和玻璃表面的鹼性物質和其他有害物質。
2．使用過的玻璃器皿的清洗
(1)使用過的培養用品應立即浸入清水，避免乾涸難洗。
(2)用洗滌劑清洗玻璃器皿，自來水清洗數遍，倒置自然乾燥。
(3)浸酸性洗液過夜。
(4)從酸性洗液撈出後自來水沖洗10．15次去除殘餘酸液，蒸餾水涮洗3次，倒置烘乾。
(5)包裝(牛皮紙或一般紙)。 (6)高壓(15磅20 min)或乾熱(160℃2 h)滅菌(見(二)消毒與滅菌)。
(7)貯存備用。
3．用於RNA提取的玻璃器皿的清洗 用於RNA操作的物品需經特殊處理以徹底去除RNA酶。
(1)洗滌劑清洗玻璃器皿，自來水清洗數遍。倒置自然乾燥。
(2)浸酸性洗液過夜。
(3)從酸性洗液撈出後，自來水沖洗10—15次去除殘餘酸液，蒸餾水涮洗3次，倒置烘乾。
(4)0．2 mol／L NaOH浸泡半日。
(5)清洗5～10次，蒸餾水涮洗3次，倒置涼幹。勿使面板直接接觸到被洗滌的物品(戴手套操作)。
(6)錫紙包裝封口。
(7)乾熱滅菌180℃ 5—8 h或溼熱滅菌15磅以上40 min。注意：自第5步以後均應戴手套操作，勿用普通紙包裝待滅菌物品，以免紙被燒焦。
4．膠塞的處理
(1)新膠塞應先用清水清洗之後再用0．2％NaOH煮沸lO-20 min。
(2)自來水清洗10次。
(3)再用1％稀鹽酸浸泡30 min。
(4)自來水清洗10次，蒸餾水涮洗3次。晾乾，高壓滅菌(見(二)消毒與滅菌)。舊膠塞不必用酸鹼處理可直接用洗滌劑煮沸和清洗數次，過蒸餾水，晾乾，包裝並高壓滅菌後，便可使用。
5．塑膠製品的清洗
(1)用洗滌劑清洗，自來水沖洗數遍。
(2)次強酸洗液浸泡2—6 h。
(3)自來水沖洗10次以上，蒸餾水涮洗3次。
(4)浸泡在70％乙醇1 h以上，備用。
(5)臨用前從70％乙醇中取出，在超淨臺內紫外線照射1 h左右方可使用。也可在洗淨後不經70％浸泡，而用塑膠袋包好，成箱地去照射6OCo滅菌。
6．加樣器頭(Tip)和離心小管(Tube)的清洗
(1)新的中國產Tip和Tube如用於非RNA提取時可用蒸餾水涮洗，晾乾，高壓滅菌後可以使用(方法同塑膠製品)。
(2)當新的中國產Tip和Tube用於RNA提取時，則用蒸餾水涮洗後再用DEPC水(抑制RNA酶)浸泡過夜後晾乾，高壓滅菌後方可使用。
(3)使用過的Tip和Tube用完後應浸泡在0．2 mol／L NaOH或0．2 mol／L鹽酸溶液中。用清水洗過，再用較稀的洗滌劑液在超聲波清洗儀中超聲處理30 min。自來水清洗5-6遍後，再用次強洗液浸泡2—24 h。自來水逐個充分沖洗並用蒸餾水涮洗，晾乾，放入Tip架或飯盒內高壓滅菌。
7．洗液的配製常用的洗液是硫酸一重鉻酸鉀溶液。洗液可根據需要配製成不同的強度(見下表)。
常用的洗液配方
成分
強酸洗液
次強酸洗液
重鉻酸鉀
63 g
3 150 g
120 g
6 000 g
濃硫酸(工業)
1 000 mL
50 000 mL
200 mL
10 000 mL
蒸餾水
200 mL
lO 000 mL
1 000 mL
50 000 mL
配製方法：
(1)將重鉻酸鉀放人大燒杯中，加入蒸餾水放在石棉網上加熱至沸騰並攪拌，使重鉻酸鉀充分溶解。
(2)將重鉻酸鉀液倒入酸缸中，然後緩慢加入硫酸並用一長玻璃棒不斷攪拌，充分混合溶解。操作時務必注意安全，穿戴好耐酸手套和圍裙，防止洗液濺到面板和衣物上。萬一不慎濺到面板上應立即用大量清水沖洗。