遷移實驗步驟

遷移實驗

目的：檢測細胞的遷移能力或藥物對細胞遷移能力的影響。

材料：HepG2細胞、BD公司 insert、BD公司 24孔板

步驟：

1. 將飢餓24小時的細胞從孵箱取出，酶解好，棄酶，加入無血清培養基，吹打混勻，離心800 x 3min.

2. 棄上清，細胞沉澱加入無血清培養基吹打混勻，計數，稀釋濃度為2 x 105個/ml.

3. 取出insert放入24孔板中。先加下室培養基（含血清1%）700微升，insert中加入200微升細胞懸液。

4. 將insert放置到24孔板的相應位置，防止insert底部有氣泡，否則將影響實驗結果。

5. 37℃孵箱 4--6小時。

6. 取出24孔板，棄去上下室培養基。下室加入700微升從-20儲存的甲醛，4度放置1小時。

7. 棄去甲醛，PBS洗一遍，下室加入蘇木精700微升。染色20-30min.

8. 回收蘇木精。Insert 用PBS洗3遍，每次都用棉棒擦拭insert裡邊，將沒有遷移的細胞擦去。

9. 下室加入PBS700uL，將Insert放好，明視場照相（200倍）。每組每個Insert隨意拍照6個視野，細胞計數取平均值。

10. 細胞計數用imageJ軟體。Open--分析--cell count。