葉綠素a無法使用校準曲線,需用幾個波長下的吸光度值,根據經驗公式來分別計算出各項指標的含量.因為葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b等物質組成,試液是多組分的混合溶液,在試液中分離這幾類物質的難度較大,且無必要.葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收,在645nm處吸光係數較小,為16.75,在663nm 處較大,為82.04;葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收,但在645nm處吸光係數較大,為45.60,在663nm 處較小,為9.27.由此可知:葉綠素a的吸收峰值出現在663nm 處,該吸收曲線延伸到645nm處,在此波長處的吸收係數不如在663 nm 處大,因此在計算公式中求算葉綠素a的含量時,需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值,再進行計算.
標準分析方法要求,葉綠體色素提取液不可渾濁,在710nm或750nm波長下測量吸光度,其值應小於葉綠素a吸收峰的吸光度值的5%,否則應重新過濾.假定樣品在663nm處的吸光度值為0.03,則在750nm處的吸光度值不得大於0.0015,對試液的清澈程度要求很高,測量710nm或750nm的目的是避免懸浮物質的干擾,一般測量水中的渾濁度所採用的波長為680nm,為避免在680nm處仍有葉綠素a產生的吸收值,故將測量渾濁度的波長選在710nm以上.在計算公式中,凡參與計算的各吸光度值都應減去710nm處的吸光度值,以扣除懸浮物質的干擾.
葉綠素a無法使用校準曲線,需用幾個波長下的吸光度值,根據經驗公式來分別計算出各項指標的含量.因為葉綠體色素由葉綠素a、葉綠素b等物質組成,試液是多組分的混合溶液,在試液中分離這幾類物質的難度較大,且無必要.葉綠素a在645nm和663nm 處均有吸收,在645nm處吸光係數較小,為16.75,在663nm 處較大,為82.04;葉綠素b 在645nm和663nm 處亦都有吸收,但在645nm處吸光係數較大,為45.60,在663nm 處較小,為9.27.由此可知:葉綠素a的吸收峰值出現在663nm 處,該吸收曲線延伸到645nm處,在此波長處的吸收係數不如在663 nm 處大,因此在計算公式中求算葉綠素a的含量時,需扣除葉綠素b在663nm和645nm 處的吸光度值,再進行計算.
標準分析方法要求,葉綠體色素提取液不可渾濁,在710nm或750nm波長下測量吸光度,其值應小於葉綠素a吸收峰的吸光度值的5%,否則應重新過濾.假定樣品在663nm處的吸光度值為0.03,則在750nm處的吸光度值不得大於0.0015,對試液的清澈程度要求很高,測量710nm或750nm的目的是避免懸浮物質的干擾,一般測量水中的渾濁度所採用的波長為680nm,為避免在680nm處仍有葉綠素a產生的吸收值,故將測量渾濁度的波長選在710nm以上.在計算公式中,凡參與計算的各吸光度值都應減去710nm處的吸光度值,以扣除懸浮物質的干擾.