Folin-酚法蛋白定量包括兩步反應:第一步生成蛋白質一銅絡合物; 第二步是酚基將磷鑰酸、磷鎢酸試劑還原. 試劑甲由A(4%碳酸鈉溶液與0.2mol/L氫氧化鈉溶液等體積混合)和B(1%硫酸銅溶液與2%的酒石酸鉀鈉溶液等體積混合)兩種溶液組成.你說的加了甲後10min再加乙,因為第一步反應肯定要時間的,試劑甲當然不能省了,其他的不說,它最起碼提供了鹼性的反應條件,Folin-酚法測定蛋白酶活力的原理是蛋白酶水解酪蛋白產生Tyr, 在鹼性條件下，Tyr與Folin試劑反應生產藍色物質，於680nm比色測定光吸收值，計算酶活力。要繪製 Tyr標準曲線,這兩個共同的步驟是第二步顯色反應.

第一步相當於雙縮脲反應，在鹼性條件下蛋白質中的肽鍵與Cu2+作用生成絡合物；第二步是基於Folin試劑(磷鉬酸和磷鎢酸試劑)在鹼性條件下極不穩定，易被酚類化合物還原生成鉬藍和鎢藍混合物 (呈藍色反應)，因此需要快速混勻 繼續實驗