SacI線性化後,透過LICl方法將構建好的重組載體轉到畢赤酵母,MD板、G418板篩選到菌落後,怎樣鑑定畢赤酵母是Mut+還是Muts,若是 Mut+如何誘導,請大家指教,不勝感激。
回覆:
用點MM、MD平板點方法。
準備幾塊MM、MD,平板用maker筆劃小格子,標號,兩種平板點標號要一一對應。
準備無菌牙籤,點取G418板上長出點菌落,先輕輕點MM平板(小格內),再點到MD平板相同標號點小格內。如此點約100個轉化子,30℃培養2-5天,觀察比較MM、MD上相同標號點菌落,MD平板上生長快,MM平板上生長緩慢或不生長點為Muts,生長速度一樣點為Mut+。
原理是Mut+能夠快速利用甲醇為碳源,而Muts則不能利用甲醇為碳源。所以Mut+能夠在含甲醇(MM)平板也快速生長,而Muts只能在含葡萄糖(MD)平板快速生長。
SacI線性化後,透過LICl方法將構建好的重組載體轉到畢赤酵母,MD板、G418板篩選到菌落後,怎樣鑑定畢赤酵母是Mut+還是Muts,若是 Mut+如何誘導,請大家指教,不勝感激。
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用點MM、MD平板點方法。
準備幾塊MM、MD,平板用maker筆劃小格子,標號,兩種平板點標號要一一對應。
準備無菌牙籤,點取G418板上長出點菌落,先輕輕點MM平板(小格內),再點到MD平板相同標號點小格內。如此點約100個轉化子,30℃培養2-5天,觀察比較MM、MD上相同標號點菌落,MD平板上生長快,MM平板上生長緩慢或不生長點為Muts,生長速度一樣點為Mut+。
原理是Mut+能夠快速利用甲醇為碳源,而Muts則不能利用甲醇為碳源。所以Mut+能夠在含甲醇(MM)平板也快速生長,而Muts只能在含葡萄糖(MD)平板快速生長。