1、加熱排氣

開啟排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡後，關上排氣閥。

2、保溫保壓

當鍋內壓力升到1Kg/cm2時，控制熱源，維持壓力至15分鐘。

3、出鍋

切斷電源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力降至0時，開啟排氣閥，旋鬆螺栓，開啟蓋子，取出滅菌物品。否則會因鍋內壓力較高，開啟氣閥後造成的壓力差可能使容器內的培養基噴濺造成棉塞沾染培養基而發生汙染，甚至使容器爆炸。

4、處理

滅菌後，通常將實驗用具放入60℃~80 ℃烘箱中烘乾，以除去滅菌時的水分，避免引起汙染。

注意事項：

1、物品放置的要求整齊、穩定。並需要留出空隙。

2、加蓋時將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內，在一兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓鬆緊一致，勿使漏氣。

3、滅菌結束時開啟滅菌鍋蓋時，注意不要把臉靠近，否則蒸汽會對臉造成傷害。