每種物質都具有其特異的吸收光譜,不同物質由於其分子結構不同,對不同波長線的吸收能力也不同。分光譜來鑑定物質性質及含量的技術,分光光度技術理論依據是指利用物質特有的Lambert-Beer定律

分光光度計的基本工作原理是基於物質對光（對光的波長）的吸收具有選擇性，不同的物質都有各自的吸收光帶，所以，當光色散後的光譜透過某一溶液時，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。在一定的波長下，溶液中物質的濃度與光能量減弱的程度有一定的比例關係，即符合比爾定律。

T=I/Iolg（Io/I）=εcb

式中，T為透過率，Io為入射光強度，I為透射光強度，A為消光值（吸光度），ε為吸收係數，b為溶液的光徑長度，c為溶液的濃度。從以上公式可以看出，當入射光、吸收係數和溶液厚度一定時，透光率是根據溶液的濃度而變化的。

分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用於核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量