Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n為擴增反應的迴圈次數，X0為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。

起始複製數越多，Ct值越小。利用已知起始複製數的標準品可作出標準曲線，其中橫座標代表起始複製數的對數，縱座標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始複製數。

PCR全稱多聚酶鏈式反應，原理是DNA的體外擴增。具體來說：在EP管里加入DNA、合成原料（dNTP、引物）、耐熱的DNA聚合酶（taq）後，放入PCR儀，PCR儀會利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈複製成雙鏈，進而達到基因複製的目的。用途：1、核酸的基礎研究：基因組克隆2、不對稱PCR製備單鏈DNA用於DNA測序3、反向PCR測定未知DNA區域4、反轉錄PCR（RT-PCR）用於檢測細胞中基因表達水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA5、熒光定量PCR用於對PCR產物實時監控6、cDNA末端快速擴增技術7、檢測基因的表達8、醫學應用：檢測細菌、病毒類疾病；診斷遺傳疾病；診斷腫瘤；應用於法醫物證學

基因表達水平一般是透過該基因轉錄的mRNA的多少來衡量的，PCR之後可以透過產量的多寡來判斷。但是普通PCR一般只能定性判斷基因表達量，實時熒光定量PCR可以透過PCR擴增來定量計算RNA含量（透過比較內參的ct值）。所以，傳統曲線只能定性判斷，實時熒光定量PCR曲線可以定性判斷。