" 在DNA聚合酶的作用下，按照半保留複製的機制沿著模板鏈延伸

PCR

以擬擴增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5′-末端和3′-末端相互補的寡核苷酸片段為引物，

在DNA聚合酶的作用下，按照半保留複製的機制沿著模板鏈延伸，直至完成新的DNA合成，重複這一過程，即可使目的DNA片段得到擴增。組成PCR反應體系的基本成分包括：模板DNA、特異性引物、DNA聚合酶、dNTP以及含有Mg2+的緩衝液。

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設計PCR 引物時的一般原則

(1)引物長度- 一般15~ 30鹼基，過短則特異性低; 過長則會引起引物間的退火而影響有

效擴增。

(2) 避免內部二級結構，避免序列內有較長的迴文結構，使引物自身不能形成髮夾結構。

(3) G/C 和A/T 鹼基均勻分佈，G/C 含量在45%~ 55% 之間，引物鹼基序列儘可能選

擇鹼基隨機分佈，避免嘌呤、嘧啶的連續排列。

(4) 要避免兩個引物間特別是3' 末端DNA 序列互補以及同一引物自身3' 末端的序列互

補，使它們不能形成引物二聚體或髮卡結構。

PCR(聚合酶鏈式反應)反應包括三個基本步驟，即：模板DNA的變性、模板DNA與引物的退火復性、引物的延伸。PCR反應體系包括5種基本成分，依次為：引物、DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Mg2+。

1、引物

引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決於引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板 DNA在體外大量擴增。

2、酶

目前有兩種Taq DNA聚合酶供應， 一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶

3、dNTP

dNTP，deoxy-ribonucleoside triphosphate（脫氧核糖核苷三磷酸）的縮寫。是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP等在內的統稱，N是指含氮鹼基，代表變數指代A、T、G、C、U等中的一種。在生物DNA、RNA合成中，以及各種PCR（RT-PCR、Real-time PCR）中起原料作用。。

4、模板

模板核酸的量與純化程度，是PCR成敗與否的關鍵環節之一，傳統的DNA純化方法通常採用SDS和蛋白酶K來消化處理標本

5、Mg2+濃度

Mg2+對PCR擴增的特異性和產量有顯著的影響，在一般的PCR反應中，各種dNTP濃度為200umol/L時，Mg2+濃度為1.5～2.0mmol/L為宜。Mg2+濃度過高，反應特異性降低，出現非特異擴增，濃度過低會降低Taq DNA聚合酶的活性，使反應產物減少。