（1）倒平板溶化牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基倒平板，水平靜置待凝。

（2）在酒精燈光焰上灼燒接種環，待冷，取一接種環金黃葡萄球菌、大腸桿菌混合菌液。

（3）左手握瓊脂平板稍抬起皿蓋，同時靠近火焰周圍，右手持接種環伸入皿內，在平板上一個區域作之形回劃線，劃線時例接種環與平板表面成30-40°角度輕輕接觸，以腕力在表面作輕快的滑動，勿使平板表面劃破或嵌進增基內。

（4）灼燒接種杯，以殺滅接種環上尚殘餘的菌液，待冷卻後醫|學教|育網蒐集整理，再將接種環伸入皿內，在第一區域劃過線的地方稍接觸一下後，轉動90°，在第二區域繼續劃線。

（5）劃畢後再灼燒接種杯，冷卻後用同樣方法在其他區域劃線。

（6）全部劃線完畢後，在平皿底用特種蠟筆註明菌種、日期、組別、姓名。將整個培養皿倒置放入恆溫培養箱。

（7）37℃經過24-48小時培養後取出觀察。注意菌落的開關、大小、顏色、邊緣、表面結構、透明度等性狀。

稀釋倒平板法（Pour Plate Method）又稱：澆注平板法。先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然後分別取不同稀釋液少許，與已溶化並冷卻至 45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出出菌落。

微生物學實驗中的一種操作方法。由於將含菌材料現加到還較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，而且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中更常用的純種分離方法是稀釋塗布平板法。