pH在pKa正負1範圍內，需要對樣品峰重新定性，需要注意；如果標品還是出峰在原標品的位置並跟樣品峰有所分離，若樣品有酸鹼性，且流動相pH與樣品pKa相近，就說明樣品和標品不是一個東西把標準新增到待測物中看保留時間，有影響，如果標品也出在樣品峰的位置，定量需要用標準加入法，就說明是基體效應導致的，流動相組分變化。

柱溫，保留時間變化很大

高效液相色譜出峰時間由多種因素決定：

1、固定相（色譜柱填料，長短，粒徑）。

2、流動相（包括有機相水相配比，pH值，有機相組成，水相中緩衝鹽組成，緩衝鹽濃度，是否加入表面活性劑，是否加入離子對試劑等）。

3、流速（改變全部出峰時間，不會改變出峰順序和相對保留時間）。 高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩衝液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。