可溶性還原糖的鑑定原理 生物組織中普遍存在的可溶性糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。
前三種糖的分子內都含有遊離的具有還原性的半縮醛羥基,因此叫做還原性糖;蔗糖的分子內沒有遊離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。
實際上本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中可溶性的還原糖的存在與否,而不能鑑定可溶性的非還原性糖。
斐林試劑由質量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液配製而成,二者混合後,立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉澱。
Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉澱,而葡萄糖本身被氧化成葡萄糖酸。
用斐林試劑鑑定可溶性還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色—棕色—磚紅色(沉澱)。
蛋白質的鑑定原理 鑑定生物組織中是否含有蛋白質時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。
雙縮脲試劑的成分是質量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.01 g/mL的硫酸銅溶液。
在鹼性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)能與銅離子作用,形成紫色或紫紅色的絡合物,這個反應叫做雙縮脲反應。
由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此,蛋白質都可與雙縮脲試劑發生顏色反應。
用於鑑定可溶性還原糖的實驗材料準備 植物組織是常用的實驗材料,但必須加以選擇。
在雙子葉植物中,光合作用的主要產物葡萄糖形成後合成為澱粉,暫時儲藏在葉子內,因此最好不用雙子葉植物的葉子作實驗材料,有些單子葉植物,如韭菜、鳶尾,並不將光合作用的初始產物轉變為澱粉,因此葉內含有大量的可溶性單糖,但是,由於葉片中葉綠素的顏色較深,對於鑑定時的顏色反應起著掩蓋作用,導致實驗現象不明顯,因此,也不宜用單子葉植物的葉子作實驗材料。
本實驗最理想的實驗材料是含糖量較高的生物組織(或器官),而且組織的顏色較淺,或近於白色的,如蘋果和梨的果實。
經試驗比較,顏色反應的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿蔔。
用於鑑定脂肪的實驗材料準備 實驗材料最好選擇富含脂肪的種子,如花生種子(取其子葉)。
供實驗用的花生種子,必須提前浸泡3~4 h。
浸泡時間短了,不容易切成片;浸泡時間過長,則組織太軟,切下的薄片不易成形。
做鑑定脂肪的實驗,教師可根據本地區的情況選用蘇丹III或蘇丹IV染液。
蘇丹III染液遇脂肪的顏色反應為橘黃色,蘇丹IV染液遇脂肪的顏色反應為紅色。
因蘇丹IV染液與脂肪的親和力比較強,所以,染色的時間應比較短,一般為1 min左右。
用於鑑定蛋白質的實驗材料準備 實驗材料最好選用富含蛋白質的生物組織(或器官),植物材料常用的是大豆,動物材料常用的是雞蛋(卵白)。
如用大豆,必須提前浸泡1~2 h,這樣容易研磨成漿。
有條件的學校,可以直接採用現成的大豆磨成的豆漿,豆漿可以購買,也可用小型的榨汁機制取。
利用豆漿作實驗材料,可以節約實驗時間。
如果用稀釋的卵白作實驗材料,效果會更好。
可溶性還原糖的鑑定原理 生物組織中普遍存在的可溶性糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖和蔗糖。
前三種糖的分子內都含有遊離的具有還原性的半縮醛羥基,因此叫做還原性糖;蔗糖的分子內沒有遊離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。
實際上本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中可溶性的還原糖的存在與否,而不能鑑定可溶性的非還原性糖。
斐林試劑由質量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液配製而成,二者混合後,立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉澱。
Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉澱,而葡萄糖本身被氧化成葡萄糖酸。
用斐林試劑鑑定可溶性還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色—棕色—磚紅色(沉澱)。
蛋白質的鑑定原理 鑑定生物組織中是否含有蛋白質時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。
雙縮脲試劑的成分是質量濃度為0.1g/mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.01 g/mL的硫酸銅溶液。
在鹼性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC-NH-CONH2)能與銅離子作用,形成紫色或紫紅色的絡合物,這個反應叫做雙縮脲反應。
由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此,蛋白質都可與雙縮脲試劑發生顏色反應。
用於鑑定可溶性還原糖的實驗材料準備 植物組織是常用的實驗材料,但必須加以選擇。
在雙子葉植物中,光合作用的主要產物葡萄糖形成後合成為澱粉,暫時儲藏在葉子內,因此最好不用雙子葉植物的葉子作實驗材料,有些單子葉植物,如韭菜、鳶尾,並不將光合作用的初始產物轉變為澱粉,因此葉內含有大量的可溶性單糖,但是,由於葉片中葉綠素的顏色較深,對於鑑定時的顏色反應起著掩蓋作用,導致實驗現象不明顯,因此,也不宜用單子葉植物的葉子作實驗材料。
本實驗最理想的實驗材料是含糖量較高的生物組織(或器官),而且組織的顏色較淺,或近於白色的,如蘋果和梨的果實。
經試驗比較,顏色反應的明顯程度依次為蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿蔔。
用於鑑定脂肪的實驗材料準備 實驗材料最好選擇富含脂肪的種子,如花生種子(取其子葉)。
供實驗用的花生種子,必須提前浸泡3~4 h。
浸泡時間短了,不容易切成片;浸泡時間過長,則組織太軟,切下的薄片不易成形。
做鑑定脂肪的實驗,教師可根據本地區的情況選用蘇丹III或蘇丹IV染液。
蘇丹III染液遇脂肪的顏色反應為橘黃色,蘇丹IV染液遇脂肪的顏色反應為紅色。
因蘇丹IV染液與脂肪的親和力比較強,所以,染色的時間應比較短,一般為1 min左右。
用於鑑定蛋白質的實驗材料準備 實驗材料最好選用富含蛋白質的生物組織(或器官),植物材料常用的是大豆,動物材料常用的是雞蛋(卵白)。
如用大豆,必須提前浸泡1~2 h,這樣容易研磨成漿。
有條件的學校,可以直接採用現成的大豆磨成的豆漿,豆漿可以購買,也可用小型的榨汁機制取。
利用豆漿作實驗材料,可以節約實驗時間。
如果用稀釋的卵白作實驗材料,效果會更好。