常用菌種保藏方法
(一) 菌種保藏的原理
根據微生物的菌種生理、生化特性，在人工創造的條件下儘量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本處於休眠狀態，生長繁殖受到抑制但又不至於死亡，以減低菌種的變異率。低溫、乾燥、缺氧、缺乏營養等環境條件都有抑制微生物的代謝作用。低溫、乾燥、真空是用於菌種藏的重要手段。選擇保藏方法時，首先應考慮方法能否長期地保持菌種原有的特性，同時也應兼顧到方法的經濟和簡便。在實際工作中，往往多種條件同時使用,以提高保藏效果。
（二）菌種保藏步驟
① 挑選特徵典型的純菌菌落；
② 確定保藏的合適菌體形態；
③ 選擇最適宜的保藏方法；
④ 定期對保藏菌種進行檢查，觀察是否發生變化，若有變化，須改變保藏方法。保藏期滿應及時進行移種。
1.瓊脂斜面低溫儲存法
（1）方法：將經常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養基）上，按規定的溫度和時間培養，待充分生長後，把培養好的新鮮菌種用牛皮紙保好，為減緩培養基的水分蒸發，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月移種一次，繼續進行保藏。若用半固體高層培養基穿刺培養，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至更長時間。
（2）適用範圍：細菌、酵母菌、黴菌保藏。
各類菌種保藏條件及時間菌種培養基儲存溫度 傳 種 時 間
細菌一般多用於營養瓊脂或根據菌種規定選用培養基 4~6℃ 芽孢桿菌3~6個月，其它細菌每個月酵母菌 一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂 4~6℃ 一般4~6個月絲狀真菌 一般用PDA瓊脂、蔡氏 每4個月移植一次（每2個月移植一瓊脂或麥芽汁瓊脂等）
3）特點：
優點是——簡便，易於推廣；一般不需要另選擇保藏用培養基；對大多數微生物都適用。
缺點是——保藏期太短；傳代次數多，易發生變異及汙染。
（4）注意事項：
保藏的菌種應是生命活力旺盛的新鮮培養物，至少應是第三代的培養物。
保藏時，破傷風桿菌可用庖肉培養基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養基。
必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、溼度以及菌種管的棉塞是否鬆動或生黴，如有異常應及時處理。
每次移植後，應與原菌種的編號、名稱逐一核對，確證培養基特徵和純度無誤後再繼續保藏。
保藏菌種的培養基應無糖，其他菌類含糖小於 2 %為宜，以免產酸過多，影響菌種存活。
銅綠假單胞菌在冰箱中易發生菌體自溶而死亡，不宜用本法儲存。
2、液體石蠟儲存法：
本法是用石蠟將培養物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水平，並可防止水分蒸發，從而延長菌種的保藏期。1）方法：將菌種接種於斜面或穿刺於0.3~ 0.5 %瓊脂半固體高層培養基中，培養好備用。
取化學純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或乾燥器內除去液體石蠟中的水分。
將上述液體石蠟加入培養好的菌種試管內，液體石蠟液麵以高出培養基最上端 1㎝為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。
適用範圍：適用於保藏部分黴菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。
（3）特點 本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。
① 保藏時，用新鮮培養物接種，應檢查純度和特徵後，方可進行保藏。
② 保藏過程中，需經常觀察斜面是否乾燥，如干燥， 需重新移種。
③ 使用菌種時，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一 邊，再用接種針挑取培養物接種到新
鮮斜面上培 養，待長出新培養物後，再移種一次到新斜面上 即可使用。
④ 將沾有少量液體石蠟的接種針浸於95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下
燒灼時，液體石蠟四濺，引起汙染。
⑤ 液體石蠟在菌種管中高出培養基的高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使
保藏效果不好；如太少，斜面容易乾燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1 ㎝為宜。
⑥ 製備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養基中易造成汙染。
常用菌種保藏方法
(一) 菌種保藏的原理
根據微生物的菌種生理、生化特性，在人工創造的條件下儘量降低微生物細胞的代謝強度，使細胞基本處於休眠狀態，生長繁殖受到抑制但又不至於死亡，以減低菌種的變異率。低溫、乾燥、缺氧、缺乏營養等環境條件都有抑制微生物的代謝作用。低溫、乾燥、真空是用於菌種藏的重要手段。選擇保藏方法時，首先應考慮方法能否長期地保持菌種原有的特性，同時也應兼顧到方法的經濟和簡便。在實際工作中，往往多種條件同時使用,以提高保藏效果。
（二）菌種保藏步驟
① 挑選特徵典型的純菌菌落；
② 確定保藏的合適菌體形態；
③ 選擇最適宜的保藏方法；
④ 定期對保藏菌種進行檢查，觀察是否發生變化，若有變化，須改變保藏方法。保藏期滿應及時進行移種。
1.瓊脂斜面低溫儲存法
（1）方法：將經常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養基）上，按規定的溫度和時間培養，待充分生長後，把培養好的新鮮菌種用牛皮紙保好，為減緩培養基的水分蒸發，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月移種一次，繼續進行保藏。若用半固體高層培養基穿刺培養，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至更長時間。
（2）適用範圍：細菌、酵母菌、黴菌保藏。
各類菌種保藏條件及時間菌種培養基儲存溫度 傳 種 時 間
細菌一般多用於營養瓊脂或根據菌種規定選用培養基 4~6℃ 芽孢桿菌3~6個月，其它細菌每個月酵母菌 一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂 4~6℃ 一般4~6個月絲狀真菌 一般用PDA瓊脂、蔡氏 每4個月移植一次（每2個月移植一瓊脂或麥芽汁瓊脂等）
3）特點：
優點是——簡便，易於推廣；一般不需要另選擇保藏用培養基；對大多數微生物都適用。
缺點是——保藏期太短；傳代次數多，易發生變異及汙染。
（4）注意事項：
保藏的菌種應是生命活力旺盛的新鮮培養物，至少應是第三代的培養物。
保藏時，破傷風桿菌可用庖肉培養基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養基。
必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、溼度以及菌種管的棉塞是否鬆動或生黴，如有異常應及時處理。
每次移植後，應與原菌種的編號、名稱逐一核對，確證培養基特徵和純度無誤後再繼續保藏。
保藏菌種的培養基應無糖，其他菌類含糖小於 2 %為宜，以免產酸過多，影響菌種存活。
銅綠假單胞菌在冰箱中易發生菌體自溶而死亡，不宜用本法儲存。
2、液體石蠟儲存法：
本法是用石蠟將培養物與空氣隔絕，以降低菌種的生理生化水平，並可防止水分蒸發，從而延長菌種的保藏期。1）方法：將菌種接種於斜面或穿刺於0.3~ 0.5 %瓊脂半固體高層培養基中，培養好備用。
取化學純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或乾燥器內除去液體石蠟中的水分。
將上述液體石蠟加入培養好的菌種試管內，液體石蠟液麵以高出培養基最上端 1㎝為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。
適用範圍：適用於保藏部分黴菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。
（3）特點 本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。
（4）注意事項：
① 保藏時，用新鮮培養物接種，應檢查純度和特徵後，方可進行保藏。
② 保藏過程中，需經常觀察斜面是否乾燥，如干燥， 需重新移種。
③ 使用菌種時，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一 邊，再用接種針挑取培養物接種到新
鮮斜面上培 養，待長出新培養物後，再移種一次到新斜面上 即可使用。
④ 將沾有少量液體石蠟的接種針浸於95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下
燒灼時，液體石蠟四濺，引起汙染。
⑤ 液體石蠟在菌種管中高出培養基的高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使
保藏效果不好；如太少，斜面容易乾燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1 ㎝為宜。
⑥ 製備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養基中易造成汙染。