感受態製備時不是一定要挑單菌落，可以在活化好的平板上劃一條線挑菌去小搖。操作時只要保證無菌就可以。另外，補充二樓的轉化後挑菌：一定要挑單菌落，而且要利索，不能沾到周圍培養基上的空白地方，因為如果不小心碰到，上面有很多連線產物及片段會隨著進一步劃線在新的培養基上積累，如果用pcr去篩選陽性，會有很多假陽性的。以上是幾年實驗的實踐經驗，請樓主參考。

是4度吧。。放4度是抑制其生長。。若放在-20度，雖然經過轉化後復甦，細胞是有些恢復了活性，但是畢竟還是很脆弱，-20度冷凍細胞，然後再解凍使用的話，很容易使細胞死亡的，加之如果本來細胞的轉化效率就不是很高的話，可能再次塗板的結果是沒有菌落長出。。。一般，我們做實驗，剩餘對的菌液是不會再用的，一是不靠譜，二是若是塗的板沒長單菌落的話，那麼這個剩餘的菌液也就沒什麼作用了：若是長出了，大可以抽提質粒，下次用時再轉，或者搖菌後用甘油保種，下次用時可選擇劃線，也可以直接搖菌。。。個人感覺那個剩餘的菌液，不存也罷。。不知道你那邊存起來時為了？？？