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  • 1 # 喬家大院喬

    PDA培養基的配製及試管斜面製作

    1.實驗材料

    1.1試劑材料

    土豆,葡萄糖,瓊脂,試管,試管架,天平,注射用硫酸鏈黴素,注射用青黴素鈉,三角瓶,滅菌鍋,電磁爐,超淨工作臺,燒杯,1mL移液器,培養皿

    1.2PDA培養基配方

    土豆(去皮)200g

    葡萄糖20g

    瓊脂15-20g

    蒸餾水1000mL

    pH 自然

    2.實驗方法與步驟

    2.1稱量和熬煮

    將土豆去皮,按自己所需的量(例如配製1L)稱取土豆,將土豆切成小塊放入鍋內,加入適量的蒸餾水,在電磁爐上加熱至沸騰,30min後用4層紗布在大量杯上過濾,棄掉濾渣,濾液用蒸餾水補足1L。

    2.2溶解

    用天平稱取20g葡萄糖加入濾液中,用玻璃棒攪拌,使其完全溶解。

    2.3分裝

    稱取8-10g瓊脂,加入所用三角瓶中,然後將濾液分裝到三角瓶中,每瓶500mL,用玻璃棒將瓊脂攪勻。

    2.4加棉塞

    培養基分裝完畢後,在三角瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進入培養基內造成汙染,並保證有良好的通氣性。

    2.5包紮

    加塞後,在棉塞外用兩層報紙包裹,其外用橡皮筋包紮好,標記。

    2.6滅菌

    將配製完成的培養基,包好的平板及其他所需用品一起放入滅菌鍋滅菌(見滅菌鍋使用方法)。

    3.試管斜面製作方法與步驟

    3.1前兩步同2.1,2.1步驟

    3.2加熱溶解

    量取500mL濾液到1000mL的燒杯中,再加入8-10g的瓊脂,用玻璃棒攪勻,放入微波爐緩慢加熱溶解,加熱其間注意不要讓培養基溢位燒杯,不時用玻璃棒攪拌。

    3.3分裝

    等瓊脂溶解後,將培養基分裝到事先準備好的試管中。分裝量約佔試管高度的1/4,管口儘量不要沾染培養基。

    3.4加塞

    培養基分裝完畢後,在試管口上塞上棉塞或橡膠塞,以阻止外界微生物進入培養基內造成汙染,並保證有良好的通氣性。

    3.5包紮

    加塞後,試管7-9支捆用橡皮筋捆好,在塞外用兩層報紙包裹,其外用橡皮筋包紮好,標記。

    3.6滅菌

    將包好的試管和其他所需滅菌物品一同放入滅菌鍋滅菌。

    3.7擺斜面

    滅菌完成後,將試管拿出,在超淨工作臺下襬成斜面,根據自己需要選擇合適的傾斜度。

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