苯異硫氰酸酯（PITC）在pH9.0的鹼性條件下對蛋白質或多肽進行處理，PITC與肽鏈的N-端的氨基酸殘基反應，形成苯氨基硫甲醯（PTC）衍生物，即PTC-肽。

然後PTC-肽用三氟乙酸處理，N-端氨基酸殘基肽鍵被有選擇地切斷，釋放出該氨基酸殘基的噻唑啉酮苯胺衍生物。

接下來將該衍生物用有機溶劑（例如氯丁烷）從反應液中萃取出來，而去掉了一個N-端氨基酸殘基的肽仍留在溶液中。

萃取出來的噻唑啉酮苯胺衍生物不穩定，經酸作用，再進一步環化，形成一個穩定的苯乙內醯硫脲（PTH）衍生物，即PTH-氨基酸。

優點

①可與一級和二級氨基酸同時反應；

②衍生產物單一、穩定，凍乾的衍生物一20℃可貯存1個月，4℃水溶液中可貯存3 d，而色譜響應值無明顯變化；

③分析時間短，測定水解氨基酸僅需12 min。

缺點

①樣品的製備較為繁瑣，需預先去除剩餘試劑，而且雖然嚴格操作，但存在於樣品中的痕量PITC試劑也會縮短分析柱的壽命；

②胱氨酸的線性不好，實踐中此法不適用於遊離胱氨酸的測定；

③由於只能使用紫外檢測，所以和使用熒光檢測的方法相比，此法檢測靈敏度較低。