一、常用的染色方法有革蘭氏染色(最基本)、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色等。 二、.1革蘭染色法（1）取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液塗片、乾燥、固定;（2）染色:用結晶紫染液染1min，水沖洗;盧戈碘液染1min，水沖洗;0.4%復紅酒精溶液染30s，水沖洗;（3）吸乾後鏡檢［2］。 1.2抗酸染色法（1）取結核桿菌陽性的痰標本（已處理）塗片、乾燥、固定。（2）染色:將石炭酸復紅染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆蓋菌膜染色5min，水沖洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水沖洗;鹼性美蘭復染30s，水沖洗。（3）吸乾後鏡檢［3］。 1.3莢膜染色法（1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液塗片、乾燥、固定;（2）染色:用石炭酸復紅染液染1min，水沖洗;95%酒精脫色5s水沖洗;20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗;0.8%孔雀綠溶液染色1min，水沖洗;（3）吸乾後鏡檢［4］。 1.4芽胞染色法（1）取等量破傷風桿菌厭氧培養菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液塗片、乾燥、固定;（2）用1%沙黃液復染10min，水沖洗;（3）幹後鏡檢。 2.1革蘭染色鏡下，金黃色葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽性菌;大腸埃希菌染成紅色、桿狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細菌學中最經典，應用最廣泛的染色法之一。脫色是影響革蘭染色的關鍵步驟，脫色時間長短直接關係到染色結果的準確性［5］。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌，為此學生難以把握。現將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步復紅復染合併一步進行，使用0.4%復紅酒精溶液作為復染劑，可達到脫色和復染雙重目的。這樣，就可以避免學生在四步法中因脫色時間不易掌握而造成染色的失敗，減少重複性實驗，提高了教學效果。 2.2抗酸染色鏡下，結核分枝桿菌染成紅色，為抗酸菌;背景和其他菌被染成藍色，為非抗酸菌。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液於塗片上，用玻片夾夾住塗片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學生容易使染液蒸乾或使染液沸騰，從而影響染色效果和汙染環境。改良後的方法是將染液直接加熱改為水浴後使用，克服上述的缺點，且染色效果良好。適合實驗教學使用。 2.3莢膜染色鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在於菌體的周圍。傳統的莢膜染色是用結晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良後，增加了脫色、媒染、復染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易於觀察，可用於學生實驗和示教片的製作。 2.4芽胞染色鏡下，破傷風桿菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液於塗片上並弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易汙染衣物和實驗臺。現改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然後製備塗片、固定、復染，即節約時間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用於教學標本片的製作。 三、簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。 操作步驟 1．塗片：用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻，塗成極薄的菌膜。 2．乾燥：可自然晾乾，或將塗片置於火焰高處微熱烘乾，但不能直接在火焰上烘烤。 3．固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上，透過迅速透過火焰2-3次（用手指觸塗片反面，以不燙手為宜）。 4．染色：加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液)，染l～2min。 5．水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止。 6．乾燥 7．鏡檢
一、常用的染色方法有革蘭氏染色(最基本)、芽孢染色、莢膜染色、鞭毛染色等。 二、.1革蘭染色法（1）取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液塗片、乾燥、固定;（2）染色:用結晶紫染液染1min，水沖洗;盧戈碘液染1min，水沖洗;0.4%復紅酒精溶液染30s，水沖洗;（3）吸乾後鏡檢［2］。 1.2抗酸染色法（1）取結核桿菌陽性的痰標本（已處理）塗片、乾燥、固定。（2）染色:將石炭酸復紅染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆蓋菌膜染色5min，水沖洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水沖洗;鹼性美蘭復染30s，水沖洗。（3）吸乾後鏡檢［3］。 1.3莢膜染色法（1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液塗片、乾燥、固定;（2）染色:用石炭酸復紅染液染1min，水沖洗;95%酒精脫色5s水沖洗;20%鞣酸溶液媒染10min水沖洗;0.8%孔雀綠溶液染色1min，水沖洗;（3）吸乾後鏡檢［4］。 1.4芽胞染色法（1）取等量破傷風桿菌厭氧培養菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液塗片、乾燥、固定;（2）用1%沙黃液復染10min，水沖洗;（3）幹後鏡檢。 2.1革蘭染色鏡下，金黃色葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽性菌;大腸埃希菌染成紅色、桿狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細菌學中最經典，應用最廣泛的染色法之一。脫色是影響革蘭染色的關鍵步驟，脫色時間長短直接關係到染色結果的準確性［5］。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌，為此學生難以把握。現將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步復紅復染合併一步進行，使用0.4%復紅酒精溶液作為復染劑，可達到脫色和復染雙重目的。這樣，就可以避免學生在四步法中因脫色時間不易掌握而造成染色的失敗，減少重複性實驗，提高了教學效果。 2.2抗酸染色鏡下，結核分枝桿菌染成紅色，為抗酸菌;背景和其他菌被染成藍色，為非抗酸菌。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液於塗片上，用玻片夾夾住塗片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學生容易使染液蒸乾或使染液沸騰，從而影響染色效果和汙染環境。改良後的方法是將染液直接加熱改為水浴後使用，克服上述的缺點，且染色效果良好。適合實驗教學使用。 2.3莢膜染色鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在於菌體的周圍。傳統的莢膜染色是用結晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良後，增加了脫色、媒染、復染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易於觀察，可用於學生實驗和示教片的製作。 2.4芽胞染色鏡下，破傷風桿菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統的方法是滴加石炭酸復紅染液於塗片上並弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易汙染衣物和實驗臺。現改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然後製備塗片、固定、復染，即節約時間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用於教學標本片的製作。 三、簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。 操作步驟 1．塗片：用灼燒滅菌冷卻後的接種環挑取少量菌體與水滴充分混勻，塗成極薄的菌膜。 2．乾燥：可自然晾乾，或將塗片置於火焰高處微熱烘乾，但不能直接在火焰上烘烤。 3．固定：手執玻片一端，有菌膜的一面朝上，透過迅速透過火焰2-3次（用手指觸塗片反面，以不燙手為宜）。 4．染色：加適量(以蓋滿菌膜為度)結晶紫染色液(或石炭酸復紅液)，染l～2min。 5．水洗：用自來沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止。 6．乾燥 7．鏡檢