葉綠素a與葉綠素b含量的測定 實驗目的和意義 葉綠素a與葉綠素b是高等植物葉綠體色素的重要組分，約佔到葉綠體色素總量的75%左右。

葉綠素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光能的作用(少量的葉綠素a還具有光能轉換的作用)，因此葉綠素的含量與植物的光合速率密切相關，在一定範圍內，光合速率隨葉綠素含量的增加而升高。另外，葉綠素的含量是植物生長狀態的一個反映，一些環境因素如干旱、鹽漬、低溫、大氣汙染、元素缺乏都可以影響葉綠素的含量與組成，並因之影響植物的光合速率。因此葉綠素含量a與葉綠素b含量的測定對植物的光合生理與逆境生理具有重要意義。實驗原理 葉綠素提取液中同時含有葉綠素a和葉綠素b，二者的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離葉綠素a和葉綠素b的情況下同時測定葉綠素a和葉綠素b的濃度，可分別測定在663nm和645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區的吸收峰）的光吸收，然後根據Lambert-Beer定律，計算出提取液中葉綠素a和葉綠素b的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb　　（1） A645=16.75Ca+45.60Cb　 （2） 公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L），82.04和9.27　分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收係數（濃度為1g/L，光路寬度為1cm時的吸光度值）；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收係數。即混合液在某一波長下的光吸收等於各組分在此波長下的光吸收之和。將上式整理，可以得到下式： Ca=0.0127A663-0.00269A645　　（3） Cb=0.0229A645-0.00468A663　　（4） 將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變為： Ca=12.7A663-2.69A645　　（5） Cb=22.9A645-4.68A663　　（6） CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645　　（7） 　　CT為葉綠素的總濃度 實驗儀器及材料 實驗材料： 菠菜或其它綠色植物 實驗儀器及試劑： UV-1700分光光度計；天平；剪刀；打孔器；研缽；移液管；漏斗；量筒；培養皿；濾紙；丙酮；石英砂；CaCO3； 實驗步驟 提取葉綠素 選取有代表性的菠菜葉片數張，於天平上稱取0.5g，（也可用打孔器打取一定數量的葉圓片，計算總的葉面積），剪碎後置於研體中，加入5ml 80%丙酮，少許CaCO3和石英砂。仔細研磨成勻漿，用濾鬥過濾到10ml量筒中，注意在研缽中加入少量80%丙酮將研缽洗淨，一併轉入研缽中過濾到量筒內，並定容至10ml。將量筒內的提取液混勻，用移液管小心抽取5ml轉入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至25ml（最終植物材料與提取液的比例為W：V＝0.5：50＝1：100，葉色深的植物材料比例要稀釋到1：200）。測量光吸收 利用722分光光度計或UV1700分光光度計，分別測定葉綠素提取液在645nm和663nm下的吸光度。結果分析 將測得的數值代入到公式（5）（6）（7）中，計算出葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的濃度。最後要計算出單位葉片鮮重中葉綠素的含量： 葉綠素a含量(mg/g鮮重)＝Ca×50ml（總體積數）×1ml/1000ml/L ÷0.5g=0.1Ca 葉綠素b含量(mg/g鮮重)＝0.1Cb 總葉綠素含量(mg/g鮮重)＝0.1CT 討論： 1． 葉綠素在蘭光區的吸收峰高於紅光區的吸收峰，為何不用蘭光區的光吸收來測定葉綠素的含量。2． 計算葉綠素a與葉綠素b含量的比值，可以得到什麼結論？ 3． 比較陽生植物和陰生植物的葉綠素a和葉綠素b的含量以及比例，可以得到什麼結論