電轉印是蛋白免疫印跡中最常見的轉印方法，即使用電場力驅動蛋白從凝膠中洗脫轉移到膜上。此過程中，膜和凝膠放置在一起，並在兩個電極之間放置濾紙。在電極之間施加電壓，蛋白在電場力的作用下遷移到膜上。
電極之間產生的電場強度（以V / cm為單位測量）是實現轉印的驅動力。電壓及電極間距都會影響蛋白從凝膠中洗脫的速率。針對不同分子量的蛋白需要進行轉印條件最佳化，以防止轉印不足（蛋白不完全從凝膠中轉移到膜上），或轉印過度（蛋白穿透印跡膜造成損失）。
轉膜流程：
1選擇轉印的方法及裝置：可選擇傳統溼轉、半乾轉或最新的快速半乾轉 方法。
2準備轉印緩衝液及試劑：準備足夠的轉印緩衝液，用於轉印槽以及凝膠、膜的預平衡。
3預平衡凝膠和膜：如有必要，用 轉印緩衝液預先平衡凝膠和印跡膜。
4組裝凝膠和膜的“三明治”：將凝膠和膜放置在被緩衝液浸溼的濾紙之間，做成轉印“三明治”。
5轉印過程：將“三明治”放入轉印槽，並加入轉印緩衝液，選擇合適的轉印條件，開始轉印過程。
轉印裝置和過程主要有三種：
溼轉系統，半乾轉系統和快速轉印系統。
溼轉系統
溼轉系統適用於大多數各種分子量的常規蛋白轉印。轉印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉印緩衝液的槽中。
文章圖片2
半乾轉系統
凝膠和膜被夾在預先潤溼緩衝液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半乾轉系統的安裝使用比溼轉簡單。
文章圖片3
快速轉印系統
快速轉印系統是最近發展出來的技術，使用專用裝置、專用濾紙及專用緩衝液來快速有效地轉印蛋白。通常濾紙和溼潤的膜預先放在一次性包裝中，簡化了轉印“三明治”的組裝。
文章圖片4
轉印膜種類
硝化纖維素膜和增強型硝化纖維素膜
硝酸纖維素膜很容易在水或轉印緩衝液中潤溼，並且與多種蛋白檢測方法相容。無支援的硝化纖維素很脆，不建議用於抗體剝離及重孵育實驗。增強型硝酸纖維素膜是含有惰性支撐結構的硝酸纖維素膜。這種額外的支撐使膜具有更高的強度和彈性，可以用於抗體剝離及重孵育，並可承受高壓滅菌（121℃），依然保持硝酸纖維素的易潤溼性。
聚偏二氟乙烯（PVDF）
PVDF 膜具有很強的蛋白結合能力（約為硝化纖維素的兩倍），並且在通常的處理中不易破裂，因此可以用於抗體的剝離和重孵育實驗。低熒光背景的PVDF膜結合了PVDF的優勢，並且在很寬的波長範圍內具有低自發熒光。在長時間曝光情況下，不會增加背景熒光水平，有利於檢測微弱的熒光訊號。
膜通常有兩種孔徑可供選擇：
大多數免疫印跡實驗，可使用孔徑為0.45 μm 的膜
0.2 μm 孔徑的膜適合轉印低分子量蛋白 (<15,000 kD)，低分子蛋白有可能穿過較大孔徑的印跡膜
轉印技巧
去除氣泡
均勻的蛋白質轉印需要三明治的各元件之間完全接觸，尤其是凝膠和膜完全接觸。氣泡會導致膜上出現空白點，蛋白轉印時會在氣泡周圍“流動”，因此請使用凝膠滾輪將這些氣泡趕出！提示：梯度凝膠最好上下滾動，而不是左右滾動。左右滾動會導致梯度凝膠翹曲和起皺。
文章圖片5
轉印前的預平衡
溼轉和傳統半乾轉時，將凝膠電泳緩衝液替換為轉印緩衝液可獲得更好的轉印效果。電泳緩衝液的帶入會增加電導率，從而導致轉印過程中產生過多的熱量。可在水中短暫沖洗凝膠，然後在轉印緩衝液中平衡凝膠15分鐘，平衡膜5分鐘。請注意，對於某些快速轉印系統，不建議使用凝膠預平衡，請遵循製造商的操作指南。
避免膜變幹
在轉印之前和之後均需保證膜的溼潤，從轉印三明治中取出後，轉印熱量會使膜容易變乾燥。對於PVDF膜尤其重要，因為PVDF膜是疏水的。應迅速將膜浸入預先準備好的緩衝液中，以免膜乾燥。如果幹了，可將硝酸纖維素膜重新在緩衝液中浸溼，而PVDF膜則需要在醇中重新活化。
end
注：本推文未經許可禁止轉載。
電轉印是蛋白免疫印跡中最常見的轉印方法，即使用電場力驅動蛋白從凝膠中洗脫轉移到膜上。此過程中，膜和凝膠放置在一起，並在兩個電極之間放置濾紙。在電極之間施加電壓，蛋白在電場力的作用下遷移到膜上。
電極之間產生的電場強度（以V / cm為單位測量）是實現轉印的驅動力。電壓及電極間距都會影響蛋白從凝膠中洗脫的速率。針對不同分子量的蛋白需要進行轉印條件最佳化，以防止轉印不足（蛋白不完全從凝膠中轉移到膜上），或轉印過度（蛋白穿透印跡膜造成損失）。
轉膜流程：
1選擇轉印的方法及裝置：可選擇傳統溼轉、半乾轉或最新的快速半乾轉 方法。
2準備轉印緩衝液及試劑：準備足夠的轉印緩衝液，用於轉印槽以及凝膠、膜的預平衡。
3預平衡凝膠和膜：如有必要，用 轉印緩衝液預先平衡凝膠和印跡膜。
4組裝凝膠和膜的“三明治”：將凝膠和膜放置在被緩衝液浸溼的濾紙之間，做成轉印“三明治”。
5轉印過程：將“三明治”放入轉印槽，並加入轉印緩衝液，選擇合適的轉印條件，開始轉印過程。
轉印裝置和過程主要有三種：
溼轉系統，半乾轉系統和快速轉印系統。
溼轉系統
溼轉系統適用於大多數各種分子量的常規蛋白轉印。轉印過程中凝膠和膜被浸入充滿轉印緩衝液的槽中。
文章圖片2
半乾轉系統
凝膠和膜被夾在預先潤溼緩衝液的濾紙之間，濾紙與平板電極直接接觸。半乾轉系統的安裝使用比溼轉簡單。
文章圖片3
快速轉印系統
快速轉印系統是最近發展出來的技術，使用專用裝置、專用濾紙及專用緩衝液來快速有效地轉印蛋白。通常濾紙和溼潤的膜預先放在一次性包裝中，簡化了轉印“三明治”的組裝。
文章圖片4
轉印膜種類
硝化纖維素膜和增強型硝化纖維素膜
硝酸纖維素膜很容易在水或轉印緩衝液中潤溼，並且與多種蛋白檢測方法相容。無支援的硝化纖維素很脆，不建議用於抗體剝離及重孵育實驗。增強型硝酸纖維素膜是含有惰性支撐結構的硝酸纖維素膜。這種額外的支撐使膜具有更高的強度和彈性，可以用於抗體剝離及重孵育，並可承受高壓滅菌（121℃），依然保持硝酸纖維素的易潤溼性。
聚偏二氟乙烯（PVDF）
PVDF 膜具有很強的蛋白結合能力（約為硝化纖維素的兩倍），並且在通常的處理中不易破裂，因此可以用於抗體的剝離和重孵育實驗。低熒光背景的PVDF膜結合了PVDF的優勢，並且在很寬的波長範圍內具有低自發熒光。在長時間曝光情況下，不會增加背景熒光水平，有利於檢測微弱的熒光訊號。
膜通常有兩種孔徑可供選擇：
大多數免疫印跡實驗，可使用孔徑為0.45 μm 的膜
0.2 μm 孔徑的膜適合轉印低分子量蛋白 (<15,000 kD)，低分子蛋白有可能穿過較大孔徑的印跡膜
轉印技巧
去除氣泡
均勻的蛋白質轉印需要三明治的各元件之間完全接觸，尤其是凝膠和膜完全接觸。氣泡會導致膜上出現空白點，蛋白轉印時會在氣泡周圍“流動”，因此請使用凝膠滾輪將這些氣泡趕出！提示：梯度凝膠最好上下滾動，而不是左右滾動。左右滾動會導致梯度凝膠翹曲和起皺。
文章圖片5
轉印前的預平衡
溼轉和傳統半乾轉時，將凝膠電泳緩衝液替換為轉印緩衝液可獲得更好的轉印效果。電泳緩衝液的帶入會增加電導率，從而導致轉印過程中產生過多的熱量。可在水中短暫沖洗凝膠，然後在轉印緩衝液中平衡凝膠15分鐘，平衡膜5分鐘。請注意，對於某些快速轉印系統，不建議使用凝膠預平衡，請遵循製造商的操作指南。
避免膜變幹
在轉印之前和之後均需保證膜的溼潤，從轉印三明治中取出後，轉印熱量會使膜容易變乾燥。對於PVDF膜尤其重要，因為PVDF膜是疏水的。應迅速將膜浸入預先準備好的緩衝液中，以免膜乾燥。如果幹了，可將硝酸纖維素膜重新在緩衝液中浸溼，而PVDF膜則需要在醇中重新活化。
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注：本推文未經許可禁止轉載。