1、 取5×TBE 緩衝液20ml 加水至200ml,配製成0.5×TBE 稀釋緩衝液,待用。
2、 膠液的製備：稱取0.4g 瓊脂糖,置於200ml 錐形瓶中,加入50ml 0.5×TBE 稀釋緩衝液,放入
微波爐裡(或電爐上)加熱至瓊脂糖全部熔化,取出搖勻,此為0.8％瓊脂糖凝膠液。加熱過程中要不時搖
動,使附於瓶壁上的瓊脂糖顆粒進入溶液。加熱時應蓋上封口膜,以減少水份蒸發。
3、 膠板的製備：將有機玻璃膠槽兩端分別用橡皮膏(寬約1cm)緊密封住。將封好的膠槽置於水
平支援物上,插上樣品梳子,注意觀察梳子齒下緣應與膠槽底面保持1mm 左右的間隙。
向冷卻至50-60℃的瓊脂糖膠液中加入溴化乙錠(E 溶液使其終濃度為0.5μg /ml(也可不把EB 加入
凝膠中,而是電泳後再用0.5μg/ml 的EB 溶液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的瓊脂糖凝膠封橡
皮膏內側,待瓊脂糖溶液凝固後將剩餘的瓊脂糖小心地倒入膠槽內,使膠液形成均勻的膠層。倒膠時的
溫度不可太低,否則凝固不均勻,速度也不可太快,否則容易出現氣泡。待膠完全凝固後撥出梳子,注意不
要損傷梳底部的凝膠,然後向槽內加入0.5×TBE 稀釋緩衝液至液麵恰好沒過膠板上表面。因邊緣效應
樣品槽附近會有一些隆起,阻礙緩衝液進入樣品槽中,所以要注意保證樣品槽中應注滿緩衝液。
4、 加樣：取10μl 酶解液與2μl 6×載樣液混勻,用微量移液槍小心加入樣品槽中。若DNA 含
量偏低,則可依上述比例增加上樣量,但總體積不可超過樣品槽容量。每加完一個樣品要更換tip 頭,以
防止互相汙染,注意上樣時要小心操作,避免損壞凝膠或將樣品槽底部凝膠刺穿。
5、 電泳：加完樣後,合上電泳槽蓋,立即接通電源。控制電壓保持在60-80V,電流在40mA 以上。
當溴酚藍條帶移動到距凝膠前沿約2cm 時,停止電泳。
6、 染色：未加EB 的膠板在電泳完畢後移入0.5μg/ml 的EB 溶液中,室溫下染色20-25 分鐘。
7、 觀察和拍照：在波長為254nm 的長波長紫外燈下觀察染色後的或已加有EB 的電泳膠板。
DNA 存在處顯示出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶。紫光燈下觀察時應戴上防護眼鏡或有機玻璃面罩,以
免損傷眼睛。 經照相機鏡頭加上近攝鏡片和紅色濾光片後將相機固定於照相架上，採用全色膠片，
光圈5.6,曝光時間10-120 秒(根據熒光條帶的深淺選擇)。
8、 DNA 分子量標準曲線的製作：在放大的電泳照片上,以樣品槽為起點,用卡尺測量λDNA 的
EcoRⅠ和HindⅢ酶切片段的遷移距離,以釐米為單位。以核苷酸數的常用對數為縱座標,以遷移距離為
橫座標,在座標紙上繪出連結各點的平滑曲線,即為該電泳條件下DNA 分子量的標準曲線。
9、 DNA 酶切片段大小的測定：在放大的電泳照片上,用卡尺量出DNA 樣品各片段的遷移距離,
根據此數值,在DNA 分子量標準曲線上查出相應的對數值,進一步計算出各片段的分子量大小(若用單
對數座標紙來繪製標準曲線,則可根據遷移距離直接查出DNA 片段的大小)。反之,若已知DNA 片段的
大小亦可由標準曲線上查出它預計的遷移距離。
10、 DNA 酶切片段排列順序的確定：根據單酶切,雙酶切和多酶切的電泳分析結果,對照DNA 酶
切片段大小的資料進行邏輯推理,然後確定各酶切片段的排列順序和各酶切位點的相對位置。以環狀
圖或直線圖表示,即成該DNA 分子的限制性內切酶圖譜。
1、 取5×TBE 緩衝液20ml 加水至200ml,配製成0.5×TBE 稀釋緩衝液,待用。
2、 膠液的製備：稱取0.4g 瓊脂糖,置於200ml 錐形瓶中,加入50ml 0.5×TBE 稀釋緩衝液,放入
微波爐裡(或電爐上)加熱至瓊脂糖全部熔化,取出搖勻,此為0.8％瓊脂糖凝膠液。加熱過程中要不時搖
動,使附於瓶壁上的瓊脂糖顆粒進入溶液。加熱時應蓋上封口膜,以減少水份蒸發。
3、 膠板的製備：將有機玻璃膠槽兩端分別用橡皮膏(寬約1cm)緊密封住。將封好的膠槽置於水
平支援物上,插上樣品梳子,注意觀察梳子齒下緣應與膠槽底面保持1mm 左右的間隙。
向冷卻至50-60℃的瓊脂糖膠液中加入溴化乙錠(E 溶液使其終濃度為0.5μg /ml(也可不把EB 加入
凝膠中,而是電泳後再用0.5μg/ml 的EB 溶液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的瓊脂糖凝膠封橡
皮膏內側,待瓊脂糖溶液凝固後將剩餘的瓊脂糖小心地倒入膠槽內,使膠液形成均勻的膠層。倒膠時的
溫度不可太低,否則凝固不均勻,速度也不可太快,否則容易出現氣泡。待膠完全凝固後撥出梳子,注意不
要損傷梳底部的凝膠,然後向槽內加入0.5×TBE 稀釋緩衝液至液麵恰好沒過膠板上表面。因邊緣效應
樣品槽附近會有一些隆起,阻礙緩衝液進入樣品槽中,所以要注意保證樣品槽中應注滿緩衝液。
4、 加樣：取10μl 酶解液與2μl 6×載樣液混勻,用微量移液槍小心加入樣品槽中。若DNA 含
量偏低,則可依上述比例增加上樣量,但總體積不可超過樣品槽容量。每加完一個樣品要更換tip 頭,以
防止互相汙染,注意上樣時要小心操作,避免損壞凝膠或將樣品槽底部凝膠刺穿。
5、 電泳：加完樣後,合上電泳槽蓋,立即接通電源。控制電壓保持在60-80V,電流在40mA 以上。
當溴酚藍條帶移動到距凝膠前沿約2cm 時,停止電泳。
6、 染色：未加EB 的膠板在電泳完畢後移入0.5μg/ml 的EB 溶液中,室溫下染色20-25 分鐘。
7、 觀察和拍照：在波長為254nm 的長波長紫外燈下觀察染色後的或已加有EB 的電泳膠板。
DNA 存在處顯示出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶。紫光燈下觀察時應戴上防護眼鏡或有機玻璃面罩,以
免損傷眼睛。 經照相機鏡頭加上近攝鏡片和紅色濾光片後將相機固定於照相架上，採用全色膠片，
光圈5.6,曝光時間10-120 秒(根據熒光條帶的深淺選擇)。
8、 DNA 分子量標準曲線的製作：在放大的電泳照片上,以樣品槽為起點,用卡尺測量λDNA 的
EcoRⅠ和HindⅢ酶切片段的遷移距離,以釐米為單位。以核苷酸數的常用對數為縱座標,以遷移距離為
橫座標,在座標紙上繪出連結各點的平滑曲線,即為該電泳條件下DNA 分子量的標準曲線。
9、 DNA 酶切片段大小的測定：在放大的電泳照片上,用卡尺量出DNA 樣品各片段的遷移距離,
根據此數值,在DNA 分子量標準曲線上查出相應的對數值,進一步計算出各片段的分子量大小(若用單
對數座標紙來繪製標準曲線,則可根據遷移距離直接查出DNA 片段的大小)。反之,若已知DNA 片段的
大小亦可由標準曲線上查出它預計的遷移距離。
10、 DNA 酶切片段排列順序的確定：根據單酶切,雙酶切和多酶切的電泳分析結果,對照DNA 酶
切片段大小的資料進行邏輯推理,然後確定各酶切片段的排列順序和各酶切位點的相對位置。以環狀
圖或直線圖表示,即成該DNA 分子的限制性內切酶圖譜。