中藥粉末鑑定主要是指透過觀察中藥材的細胞、內含物和顆粒物質的顯微特徵來達到鑑定藥材真偽的目的。通常用於藥材粉末、外形較大或組織構造無鑑別特徵的藥材、破碎藥材、含飲片粉末的中成藥等。
隨著中成藥檢驗水平的不斷髮展,各版《中國藥典》收載的顯微鑑別項的中藥成方製劑不斷增加。
除了植物類藥材以外,一些礦物或動物類藥材也具有穩定的粉末特徵,在中成藥中也可以用於顯微鑑別,以判別這些中藥材是否被投料。如在中成藥的質量標準中經常利用埋有細小方形結晶的淡黃棕色無定形團塊鑑別麝香;利用表面有極細的菌絲體的無色體壁碎片鑑別殭蠶等。礦物類中藥材如硃砂、金礞石、石膏等的粉末特徵,在中成藥標準中也經常被進行顯微鑑別。
顯微化學鑑別的研究與應用
顯微化學鑑別法是有針對性地進行與目標成分產生沉澱、結晶、顏色或特殊變化的反應,透過檢查中藥材細胞壁或細胞內含物的化學物質的性質,從而達到鑑定的一種方法,具體包括顯微化學反應和顯微定位。
一是顯微化學反應。顯微化學反應是將生藥的乾粉、徒手切片、昇華物或浸出液少量,置於載玻片上,滴加某些化學試劑使產生沉澱、結晶或特殊的顏色,在顯微鏡下觀察反應結果,從而進行鑑定。
二是顯微化學定位。顯微化學定位一般用於中藥材有效成分組織中的化學定位研究,確定其具體存在部位或動態轉移途徑。其應用必須在所鑑定的藥材有效成分明確的情況下,然後選擇對有效成分具有特殊反應的化學試劑,使之產生顏色或結晶,用顯微鏡確定有效成分的存在部位。
顯微定量研究與應用
顯微定量法是利用藥材某種組織具有相對穩定數量的特點,採用質量分析法或容量分析法測定成分含量的一種方法。該法開闢了中藥含量測定的新途徑,尤其為有效成分不清楚的藥材的含量測定提供了一種可能的解決方法。近年來,該法被應用到多種中藥及中成藥的含量測定研究中,具有簡便、結果可靠的特點,但目前在質量標準中未見應用。
一是參比物顯微定量。參比物顯微定量法雖然具有操作簡便、快速等優點,但在實際應用中存在誤差較大等缺點,目前已經被非參比物顯微定量法所取代。
二是非參比物顯微定量。藥材的顯微特徵是藥材自身的固有常數,利用這一性質,有學者採用自身的顯微特徵代替參比物的方法,並利用容量分析法或質量分析法,對藥材某一專屬特徵進行計量分析,創立了非參比物顯微定量法。該法改進了參比物顯微定量法的缺點,同時加入了現代統計法,使得到的結果更加準確、可靠。目前主要用於含量測定、質量判別、易混淆中藥鑑別等領域,並且在中藥顯微特徵常數與其活性指標成分的相關研究方面也取得一定進展。
顯微技術的發展
一是偏光顯微鏡。偏光顯微鏡又名偏振光顯微鏡、極化顯微鏡,主要用於地質學上觀察和分析礦石薄片的光學性質,故又稱為礦物顯微鏡。在偏光顯微鏡下,非均質性(各向異性)的物體或某些分子排列沒有次序的有機物會呈現出顏色不同、強弱不一的光彩,其他不起偏光作用的均質性(各向同性)物質在這種暗視野中不發出任何光彩,仍保持黑暗狀態。目前,偏光顯微鏡用於中藥鑑別正逐漸受到重視,但仍需不斷積累研究資料。
二是掃面電子顯微鏡。掃面電子顯微鏡是1964年以後迅速發展的一種新型電子光學儀器,成像原理類似於電視攝影顯像方式,可獲得清晰的三維影象,具有直接觀察樣品表面結構、景深大、放大範圍廣、解析度高等優點,主要應用於藥材花粉粒、葉表面、種皮表面的鑑別研究。
三是顯微攝影與影象分析。傳統的顯微鑑別多是在顯微鏡下觀察特徵後,手工描繪特徵,難免有人為的主觀誤差。後來使用普通相機與顯微鏡相連的顯微攝影彌補了這一不足,現在已將數碼相機(或CCD)代替了普通相機,且可以用計算機對影象進行進一步的處理。目前,二者正在被逐步推廣使用。影象分析技術有助於中藥顯微鑑別向人工智慧化方向發展,併為近緣品種和混淆品種中藥鑑別提供了比較可靠的分析手段。但因其只是部分組織特徵的定性定量描述,並且技術規範性有待進一步完善,故現在只作為中藥顯微鑑別的輔助手段。
顯微鑑別法存在的問題
顯微鑑別一直是鑑別藥材真偽的手段之一,有著其他鑑別手段不可替代的作用。但在顯微鑑別時,由於中藥材(飲片)或中成藥的質量情況多種多樣,當觀察到中藥材(飲片)樣品為偽品或中成藥存在按處方或製法規定不應該出現的顯微特徵時,如何下結論值得探討。
一是檢驗中藥材(飲片)時,當觀察到一些標準規定以外的顯微特徵時,參考文獻、對照藥材都確認此種藥材(飲片)不具有此種特徵。如山藥的地區習慣用藥參薯,除可檢出石細胞外,其他特徵符合規定,該如何下結論。
二是檢驗以飲片粉末與浸膏混合投料的中成藥製劑時,應以浸膏投料的飲片檢出此種飲片的粉末特徵。如鏡檢出現機率高於100%的(製片5張,每片都能檢出),其他顯微特徵符合規定,該如何下結論。
三是檢驗含飲片粉末的製劑時,當飲片粉末粒度較細而導致粉末特徵被破壞,或幾種藥材的特徵相似難以甄別,是否可以使用另一些具有鑑別意義的顯微特徵作為輔助鑑別特徵,幫助判斷製劑中是否投入了此種飲片原料,以免出現假陰性,影響結果判斷。
目前,在實際的中藥顯微檢驗工作中,檢驗人員除了必須掌握顯微鑑別的操作規程外,對於顯微鑑別結果的判定,仍是以各自的經驗為主。因此,有必要在已有的顯微鑑別操作規程(SOP) 的基礎上,增加一些判別方面的內容,以減少人為因素的影響。
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中藥粉末鑑定主要是指透過觀察中藥材的細胞、內含物和顆粒物質的顯微特徵來達到鑑定藥材真偽的目的。通常用於藥材粉末、外形較大或組織構造無鑑別特徵的藥材、破碎藥材、含飲片粉末的中成藥等。
隨著中成藥檢驗水平的不斷髮展,各版《中國藥典》收載的顯微鑑別項的中藥成方製劑不斷增加。
除了植物類藥材以外,一些礦物或動物類藥材也具有穩定的粉末特徵,在中成藥中也可以用於顯微鑑別,以判別這些中藥材是否被投料。如在中成藥的質量標準中經常利用埋有細小方形結晶的淡黃棕色無定形團塊鑑別麝香;利用表面有極細的菌絲體的無色體壁碎片鑑別殭蠶等。礦物類中藥材如硃砂、金礞石、石膏等的粉末特徵,在中成藥標準中也經常被進行顯微鑑別。
顯微化學鑑別的研究與應用
顯微化學鑑別法是有針對性地進行與目標成分產生沉澱、結晶、顏色或特殊變化的反應,透過檢查中藥材細胞壁或細胞內含物的化學物質的性質,從而達到鑑定的一種方法,具體包括顯微化學反應和顯微定位。
一是顯微化學反應。顯微化學反應是將生藥的乾粉、徒手切片、昇華物或浸出液少量,置於載玻片上,滴加某些化學試劑使產生沉澱、結晶或特殊的顏色,在顯微鏡下觀察反應結果,從而進行鑑定。
二是顯微化學定位。顯微化學定位一般用於中藥材有效成分組織中的化學定位研究,確定其具體存在部位或動態轉移途徑。其應用必須在所鑑定的藥材有效成分明確的情況下,然後選擇對有效成分具有特殊反應的化學試劑,使之產生顏色或結晶,用顯微鏡確定有效成分的存在部位。
顯微定量研究與應用
顯微定量法是利用藥材某種組織具有相對穩定數量的特點,採用質量分析法或容量分析法測定成分含量的一種方法。該法開闢了中藥含量測定的新途徑,尤其為有效成分不清楚的藥材的含量測定提供了一種可能的解決方法。近年來,該法被應用到多種中藥及中成藥的含量測定研究中,具有簡便、結果可靠的特點,但目前在質量標準中未見應用。
一是參比物顯微定量。參比物顯微定量法雖然具有操作簡便、快速等優點,但在實際應用中存在誤差較大等缺點,目前已經被非參比物顯微定量法所取代。
二是非參比物顯微定量。藥材的顯微特徵是藥材自身的固有常數,利用這一性質,有學者採用自身的顯微特徵代替參比物的方法,並利用容量分析法或質量分析法,對藥材某一專屬特徵進行計量分析,創立了非參比物顯微定量法。該法改進了參比物顯微定量法的缺點,同時加入了現代統計法,使得到的結果更加準確、可靠。目前主要用於含量測定、質量判別、易混淆中藥鑑別等領域,並且在中藥顯微特徵常數與其活性指標成分的相關研究方面也取得一定進展。
顯微技術的發展
一是偏光顯微鏡。偏光顯微鏡又名偏振光顯微鏡、極化顯微鏡,主要用於地質學上觀察和分析礦石薄片的光學性質,故又稱為礦物顯微鏡。在偏光顯微鏡下,非均質性(各向異性)的物體或某些分子排列沒有次序的有機物會呈現出顏色不同、強弱不一的光彩,其他不起偏光作用的均質性(各向同性)物質在這種暗視野中不發出任何光彩,仍保持黑暗狀態。目前,偏光顯微鏡用於中藥鑑別正逐漸受到重視,但仍需不斷積累研究資料。
二是掃面電子顯微鏡。掃面電子顯微鏡是1964年以後迅速發展的一種新型電子光學儀器,成像原理類似於電視攝影顯像方式,可獲得清晰的三維影象,具有直接觀察樣品表面結構、景深大、放大範圍廣、解析度高等優點,主要應用於藥材花粉粒、葉表面、種皮表面的鑑別研究。
三是顯微攝影與影象分析。傳統的顯微鑑別多是在顯微鏡下觀察特徵後,手工描繪特徵,難免有人為的主觀誤差。後來使用普通相機與顯微鏡相連的顯微攝影彌補了這一不足,現在已將數碼相機(或CCD)代替了普通相機,且可以用計算機對影象進行進一步的處理。目前,二者正在被逐步推廣使用。影象分析技術有助於中藥顯微鑑別向人工智慧化方向發展,併為近緣品種和混淆品種中藥鑑別提供了比較可靠的分析手段。但因其只是部分組織特徵的定性定量描述,並且技術規範性有待進一步完善,故現在只作為中藥顯微鑑別的輔助手段。
顯微鑑別法存在的問題
顯微鑑別一直是鑑別藥材真偽的手段之一,有著其他鑑別手段不可替代的作用。但在顯微鑑別時,由於中藥材(飲片)或中成藥的質量情況多種多樣,當觀察到中藥材(飲片)樣品為偽品或中成藥存在按處方或製法規定不應該出現的顯微特徵時,如何下結論值得探討。
一是檢驗中藥材(飲片)時,當觀察到一些標準規定以外的顯微特徵時,參考文獻、對照藥材都確認此種藥材(飲片)不具有此種特徵。如山藥的地區習慣用藥參薯,除可檢出石細胞外,其他特徵符合規定,該如何下結論。
二是檢驗以飲片粉末與浸膏混合投料的中成藥製劑時,應以浸膏投料的飲片檢出此種飲片的粉末特徵。如鏡檢出現機率高於100%的(製片5張,每片都能檢出),其他顯微特徵符合規定,該如何下結論。
三是檢驗含飲片粉末的製劑時,當飲片粉末粒度較細而導致粉末特徵被破壞,或幾種藥材的特徵相似難以甄別,是否可以使用另一些具有鑑別意義的顯微特徵作為輔助鑑別特徵,幫助判斷製劑中是否投入了此種飲片原料,以免出現假陰性,影響結果判斷。
目前,在實際的中藥顯微檢驗工作中,檢驗人員除了必須掌握顯微鑑別的操作規程外,對於顯微鑑別結果的判定,仍是以各自的經驗為主。因此,有必要在已有的顯微鑑別操作規程(SOP) 的基礎上,增加一些判別方面的內容,以減少人為因素的影響。
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