蛋白純化的原理是利用蛋白質的物理化學性質，如分子大小、電荷、親水性、親油性、結構等差異，將混合的蛋白質分離出來，達到純化的目的。

蛋白純化的步驟包括以下幾個方面：

1. 細胞破碎：將含有目標蛋白的細胞破碎，釋放出蛋白質。

2. 溶液製備：將破碎後的細胞溶液加入緩衝液中，調節pH值和離子強度，以保持蛋白質的穩定性。

3. 分離：利用不同的分離技術，如離心、過濾、層析、電泳等，將目標蛋白質從其他蛋白質和雜質中分離出來。

4. 純化：通過多次分離和純化步驟，將目標蛋白質純化到足夠純度。

5. 鑒定：利用蛋白質分析技術，如SDS-PAGE、Western blot等，確定純化後的蛋白質的分子量、結構和功能等。

6. 儲存：將純化後的蛋白質儲存於適當的條件下，以保持其穩定性和活性。

His標籤蛋白純化是利用多組氨基酸序列(6-10個His殘基)構建的小peptide HHHHHH(His-tag)與鎳離子親和柱之間的相互作用，實現對含有His-tag的蛋白的選擇性吸附、洗脫和純化。其步驟如下：

1. 表達目的基因：將目的基因通過重組融合表達技術構建成含有His-tag的重組蛋白。

2. 細胞裂解：利用超聲波或高壓細胞破解機等方法將細胞內蛋白質裂解釋放。

3. 鎳離子親和層析：將細胞裂解物加入到預先平衡好的鎳離子親和樹脂上，靶向吸附含有His-tag的目的蛋白。

4. 洗脫無關蛋白：通過洗滌，移除非特異結合的無關蛋白，保留目的蛋白。

5. 低pH水解：在低pH條件下去除在親和樹脂上的His-tag，以使目的蛋白從親和樹脂上解離。

6. 再次洗脫：將目的蛋白從親和樹脂上洗脫下來。

7. 對純化的樣品進行檢測：通過SDS-PAGE或Western blot等方法對蛋白進行鑒定和定量，確保其純度和質量。

需要注意的是，His標籤蛋白純化方法雖然簡單易行，但也存在一些局限性，如只能針對帶有His-tag的蛋白進行純化、可能會影響目的蛋白結構和功能等。因此，在選擇蛋白純化方法時需綜合考慮各種因素，選用最適合自己實驗需要的方法。