實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

PCR(聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。

恆溫PCR和實時熒光定量PCR的不同，是不同在實時熒光定量PCR的系統中加入了熒光染料（SYBR Green 或Taqman 探針等等）。以SYBR Green為例，這種染料可以結合在雙鏈的DNA上，當PCR不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈DNA也在增加，熒光染料結合也越多，熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭，可以定量檢測熒光的強度，轉換成數值。這樣就可以實時記錄反映體系中DNA的反應情況。

熒光PCR更有優勢，因為熒光PCR靈敏度高於恆溫PCR，同樣價格也高一些。