梯度洗脫（gradient elution）又稱為梯度淋洗或程序洗提。 在氣相色譜中，為了改善對寬沸程樣品的分離和縮分析間週期，廣泛採用程序升溫的方法。而在液相色譜中則採用梯度洗脫的方法。在同一個分析週期中，按一定程度不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個複雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。 梯度洗脫的優點：

1.縮短分析週期；

2.提高分離能力；

3.峰型得到改善，很少拖尾；

4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。 梯度洗脫的原理： 流動相由幾種不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例改變流動相的極性，使每個流出的組分都有合適的容量因子k'，並使樣品種的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。 梯度洗脫特點： 提高柱效改善檢測器的靈敏度當樣品中的一個峰的k'值和最後一個峰的k'值相差幾十倍至幾百倍時，使用梯度洗脫效果特別好。梯度洗脫中為保證流速的穩定，必須使用恆流泵，否則難獲重複結果。

在液相色譜分離條件中，重要的參數就是洗脫條件，其中分離條件又分為等度洗脫和梯度洗脫。

梯度洗脫:在同一個分析週期中，按程序不斷改變流動相的濃度配比

等度洗脫則是指從頭到尾只是用同一個流動相。

用不用梯度洗脫，主要看雜質的情況。同一物質有梯度和等度兩種條件時，選梯度較高。雜質與雜質、主峰、溶劑峰的分離度要好(不好的話就要用梯度)。

(1)雜質和主成分極性相差很大，雜質要全能洗脫出來(有時等度情況下從兩三個小時雜質也衝出不來，就須考慮等度)。

(2)雜質和主成分極性相差較大，雜質出峰太晚(等度衝兩個小時出來個雜質，就可以通過梯度縮短檢樣時間)

(3)還有就是雜質極性比主峰的大，等度時要想主峰時間適雜質全堆在前邊，雜質分開主峰又出峰太晚，這種情況也得考慮梯度洗脫。

在色譜分析時，等度洗脫和梯度洗脫各有優點和劣勢。

等度洗脫

優點

對於等度洗脫而言，由於方法運行時，流動相的比例不發生變化，所以它對儀器的要求不高，需要一個單元泵就可以運行方法。

其次，由於等度洗脫條件單一，所以比較容易用來摸索方法設置，例如改變流動相比例，改變柱溫等條件。

並且由於等度洗脫每次運行時的流動相比例相同，所以相同方法運行多個樣品時，樣品之間不需要設置平衡時間來讓系統恢復到所需的流動相比例。

缺點

但是它也有缺點，那就是越往後出峰的組分色譜峰越寬。

並且大多數等度洗脫的方法分析時間較長。

梯度洗脫

又稱為梯度淋洗或程序洗脫。

在氣相色譜中，為了改對寬沸程樣品的分離和縮短分析週期，一般採用程序升溫的方法。而在液相色譜中對組分複雜的樣品則採用梯度洗脫的方法。在同一個分析週期中，按程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個複雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。

優點

而梯度洗脫能夠規避掉等度洗脫的問題，峰型得到改，很少拖尾。例如梯度洗脫的樣品峰，無論先出峰還是後出峰的組分，它們的峰形基本能保尖銳對稱。

其次由於梯度洗脫通常設置的流動相比例是讓洗脫強度越來越強，這樣能保在較短的時間內，讓樣品中強保留組分也能被洗脫出來。

缺點

但是伴隨著這些優點也會有對應的缺點，先它對儀器的配置要求較高，通常需要配置四元泵或者二元泵。

其次它在每次運行樣品之間，需要設置的平衡時間，來讓系統中流動相的比例到達初始流動相比例。

之後，由於它的方法設置複雜，例如影響分離的有初始流動相比例、流動相的梯度變化、結束流動相比例、柱溫箱溫度等，所以方法的開發和優化會較為複雜。而且有時引起基線漂移。